エンドサイトーシスと食作用

受容体を介したエンドサイトーシス研究用リガント

コレステロールなどの分子は受容体を介したエンドサイトーシスにより細胞外部環境から効率的に取り込まれます。このプロセスでは原形質膜におけるタンパク質受容体の挿入と、それに続く受容体-リガンド複合体のエンドサイトーシスが生じます。Invitrogenでは低密度リポタンパク質、リポ多糖類、トランスフェリン、EGF、ヒアルロン酸、オボアルブミン、インシュリンのコンジュゲートなど、受容体を介したエンドサイトーシス研究用にいくつかの製品を提供しています。

受容体を介したエンドサイトーシス研究用製品

製品	説明
低密度リポタンパク質(LDL) 複合体	未修飾アポタンパク質を含むLDLはコレステロールの正常な輸送と取り込みの追跡に有用 アセチル化アポタンパク質を含むLDLは内皮細胞やミクログリア細胞の細胞表面受容体の研究に有用
蛍光リポ多糖類(LPS)	LPSの結合および輸送プロセスのモニタリングに有用 カルシウムやpHまたはオルガネラ選択的色素などの蛍光インジケータと併用すると、細胞内局在やLPSに反応して生じるリアルタイム変化をモニタリングできる
トランスフェリンコンジュゲート	エンドソームの変化と挙動の追跡、抗原-抗体複合体の取り込みのモニタリング、受容体輸送の観察、受容体結合親和性の測定に用いられる トランスフェリンは蛍光LDLと併用することによりlysosomally directed(リソソーム向性)エンドソーム経路とリサイクリングエンドソーム経路を識別することができる
上皮増殖因子誘導体	EGF受容体の細胞膜上での移動およびエンドサイトーシスの追跡に用いられる InvitrogenのAlexa Fluor®とTexas Red®色素標識EGF複合体は蛍光標識ストレプトアビジンと複合体を形成したビオチン化EGFから構成されており、EGFの直接コンジュゲートとは異なりシグナルを増強することなく検出することができる
BODIPY® FLヒアルロン酸	ヒアルロン酸(HA)タンパク質相互作用の直接検出に有用 緑色蛍光ヒアルロン酸コンジュゲート
DQオボアルブミン	フローサイトメトリーおよび顕微鏡を用いるアッセイにおいてマクロファージを介した抗原処理の研究に有用 プロテアーゼによって分解されるまで、DQオボアルブミンコンジュゲートの蛍光はほぼ完全に消光されている コンジュゲートはpH3-9の範囲でpHに対する感受性を示さず、光に安定で、バックグラウンドが低い

蛍光低密度リポタンパク質複合体

受容体を介したエンドサイトーシスにより細胞にコレステロールを運ぶヒトLDL複合体はコレステロールエステルとトリグリセリドの核から構成されており、リン脂質、非エステル化コレステロールおよびアポタンパク質B100の単一コピーに取り囲まれています。内部に取り込まれるとLDLが受容体から解離し、リソソームに移動します。Invitrogenでは正常なコレステロールの伝達と取り込みを追跡するための未修飾アポタンパク質を含む低密度リポタンパク質(LDL)複合体を提供しています。アセチル化アポタンパク質に特異的な細胞表面受容体(内皮細胞、ミクログリア細胞など)研究用として、当社ではこの修飾をした標識LDL複合体を提供しています。また、当社では未標識のアセチル化および非アセチル化LDLを提供しており、抗腫瘍薬の癌細胞への選択的輸送で効率的に機能していることが報告されています¹。

DiIアセチル化低密度リポタンパク質(赤橙色)で標識し、DAPI(青色)で染色したラット海馬凍結切片中のミクログリア細胞。

低密度リポタンパク質複合体

Label	Ex/Em *	Cat.No.
* およその最大励起(Ex)蛍光(Em)(nm)。 †Ac = アセチル化LDL
DiI	554/571	L3482
BODIPY® FL	515/520	L3483
DiI Ac †	554/571	L3484
BODIPY® FL Ac †	510/518	L3485
Alexa Fluor® 488 Ac †	495/519	L23380
Alexa Fluor® 594 Ac †	590/617	L35353
Unlabeled LDL Ac †	N/A	L35354
Unlabeled LDL	N/A	L3486

蛍光リポ多糖類

リポ多糖類(LPS)の結合と輸送プロセスをモニターするため、Invitrogenでは大腸菌Escherichia coliから得られたLPSの蛍光コンジュゲートを提供しています。蛍光LPSコンジュゲートとカルシウム、pHまたはオルガネラ選択的染色などの蛍光インジケータを併用することにより、細胞内局在とLPSに対する反応のリアルタイム変化をモニターすることができます。

Echerichia coli serotype 055:B5由来蛍光リポ多糖類

Label	Ex/Em *	Cat.No.
* およその最大励起(Ex)蛍光(Em)(nm)。†高濃度ではミセルや凝集体の状態となり、BODIPY® FL の最大蛍光波長は 513 nmから 620 nmまでシフトする2。
BODIPY® FL	503/513 †	L23350
Alexa Fluor® 488	495/519	L23351
Alexa Fluor® 568	578/603	L23352
Alexa Fluor® 594	590/617	L23353

トランスフェリンコンジュゲート

Invitrogenでは受容体を介したエンドサイトーシスプロセスを追跡するための標識した第二鉄(Fe³⁺)ヒトトランスフェリンコンジュゲートを開発しました。ビオチン化コンジュゲートまたはいくつかの蛍光コンジュゲートからお選びいただけます。エンドソームの変化と挙動の追跡、抗原-抗体複合体の取り込みのモニタリング、受容体輸送の観察、受容体結合親和性の測定などに用いることができます。また、蛍光トランスフェリンを蛍光LDLと併用することによりlysosomally directed(リソソーム向性)エンドソーム経路とリサイクリングエンドソーム経路の識別に用いることができます。

Alexa Fluor® 488トランスフェリン(緑色)とともにインキュベートした、固定・浸透処理済みのA431細胞。トランスフェリン受容体はマウスIgG₁モノクローナル抗体で同定し、Alexa Fluor® 555ヤギ抗マウスIgG抗体(赤色)で視覚化した。黄色蛍光は共存領域を示す。核はDAPI(青色)で染色した。

トランスフェリンコンジュゲート

Label	Ex/Em *	Cat.No.
* およその最大励起(Ex)蛍光(Em)(nm)。N/A:該当しません。
Biotin-XX	NA	T23363
Alexa Fluor® 488	495/519	T13342
Alexa Fluor® 555	555/565	T35352
Alexa Fluor® 568	578/603	T23365
Alexa Fluor® 594	590/617	T13343
Alexa Fluor® 633	632/647	T23362
Alexa Fluor® 647	650/668	T23366
Alexa Fluor® 680	679/702	T35357

上皮増殖因子誘導体

蛍光標識上皮増殖因子(EGF)を用いてEGF受容体の細胞膜上での移動およびエンドサイトーシスを追跡することができます。EGF受容体の発現レベルは一般に低いので、フルオロフォアを直接標識した場合、測定可能なシグナルを得るために、シグナルを増幅する必要があります。蛍光標識ストレプトアビジンと複合体を形成させたビオチン化EGFは有意に明るく、通常、シグナルを増幅することなく検出することができます。この特性は当社のAlexa Fluor®およびTexas Red®色素標識EGF複合体にも認められます。

Alexa Fluor® 488上皮増殖因子で同定したHeLa生細胞の初期エンドソーム(緑色)。その後、細胞をパラホルムアルデヒドで固定し、後期エンドソームタンパク質であるRhoBに対する抗体で標識した。その抗体を二次抗体で視覚化した(赤色)。核はTO-PROR-3アイオダイドで染色した(青色-擬似カラー)。画像はブリストル大学のHarry Mellor氏からの提供。

上皮増殖因子誘導体

Label	Ex/Em *	Cat.No.
* およその最大励起(Ex)蛍光(Em)(nm)。†ビオチン化EGFと蛍光標識ストレプトアビジンとのコンジュゲート。 N/A:該当しません。
Alexa Fluor® 488 †	495/519	E13345
Alexa Fluor® 555 †	555/565	E35350
Texas Red® †	595/615	E3480
Alexa Fluor® 647 †	650/665	E35351
Biotin	<300/none	E3477
Unlabeled EGF	NA	E3476

BODIPY® FLヒアルロン酸

細胞外マトリックスの主なムコ多糖類(GAG)成分であるヒアルロン酸は細胞の接着、運動性、増殖および分化に関与しています。この比較的単純で側鎖を持たない多糖類の生物学的作用の多くは、細胞表面受容体などのタンパク質との相互作用を介して発揮されます。Invitrogenではヒアルロン酸-タンパク質相互作用を直接検出する多くの用途にお使いいただける緑色蛍光BODIPY® FL色素標識ヒアルロン酸誘導体を提供しています^3,4。

DQオボアルブミンを用いた抗原処理

Invitrogenの自己消光オボアルブミンコンジュゲートはフローサイトメトリーおよび顕微鏡を用いるアッセイにおけるマクロファージ媒介抗原処理の研究用にデザインされています。当社のBODIPY® FL標識オボアルブミンコンジュゲートは従来のFITC-オボアルブミンやFITC-BSAと比較して下記のような長所があります:

• pH3-9の範囲でpHに対する感受性を示さない
• 光安定性が向上
• バックグラウンドが低い

DQオボアルブミンコンジュゲートの蛍光は、プロテアーゼによって分解されるまでほぼ完全に消光されます。フルオレセイン コンジュゲートを用いた場合では、同程度の消光を得るために、はるかに大量に標識される必要があります。このことはDQオボアルブミンの抗原エピトープはFITCコンジュゲートよりよく保存されていることを意味し、したがって抗原処理においてすぐれたプローブになります。
インシュリンコンジュゲートも一部扱っています。

分子内自己消光がなくなる仕組み。大量に標識され、ほぼ完全に消光していた基質は、酵素加水分解により分子内自己消光が緩和され、明るい蛍光反応産物を生成します。

参考文献：

1. Bioconjug Chem 5, 105 (1994); 2. J Biol Chem 271, 4100 (1996); 3. J Biol Chem 277, 4585 (2002); 4. Bioconjug Chem 12, 1085 (2001).

製品：

Cat.No.	製品名	サイズ
光褪色など多くの点について、FluoresceinコンジュゲートよりAlexa Fluor® 488コンジュゲートが優れています(レファレンスD参照)。
A13100	albumin from bovine serum (BSA), Alexa Fluor® 488 conjugate	5 mg
A34786	albumin from bovine serum (BSA), Alexa Fluor® 555 conjugate	5 mg
A34787	albumin from bovine serum (BSA), Alexa Fluor® 680 conjugate	5 mg
A23015	albumin from bovine serum (BSA), fluorescein conjugate	5 mg
D12053	DQTM ovalbumin *special packaging*	5 x 1 mg
E13345	epidermal growth factor, biotinylated, complexed to Alexa Fluor® 488 streptavidin (Alexa Fluor® 488 EGF complex)	100 μg
E3476	epidermal growth factor (EGF) *from mouse submaxillary glands*	100 μg
E3477	epidermal growth factor, biotin-XX conjugate (biotin EGF)	20 μg
E3480	epidermal growth factor, biotinylated, complexed to Texas Red® streptavidin (Texas Red® EGF complex)	100 μg
E3481	epidermal growth factor, tetramethylrhodamine conjugate (rhodamine EGF)	20 μg
E35350	epidermal growth factor, biotinylated, complexed to Alexa Fluor® 555 streptavidin (Alexa Fluor® 555 EGF complex)	100 μg
E35351	epidermal growth factor, biotinylated, complexed to Alexa Fluor® 647 streptavidin (Alexa Fluor® 647 EGF complex)	100 μg
I13269	insulin, human, recombinant from E. coli, fluorescein conjugate (FITC insulin) *monolabeled* *zinc free*	100 μg
L23350	lipopolysaccharides from Escherichia coli serotype 055:B5, BODIPY® FL conjugate	100 μg
L23351	lipopolysaccharides from Escherichia coli serotype 055:B5, Alexa Fluor® 488 conjugate	100 μg
L23352	lipopolysaccharides from Escherichia coli serotype 055:B5, Alexa Fluor® 568 conjugate	100 μg
L23353	lipopolysaccharides from Escherichia coli serotype 055:B5, Alexa Fluor® 594 conjugate	100 μg
L23356	lipopolysaccharides from Salmonella minnesota, Alexa Fluor® 488 conjugate	100 μg
L23380	low-density lipoprotein from human plasma, acetylated, Alexa Fluor® 488 conjugate (Alexa Fluor® 488 AcLDL) *1 mg/mL*	200 μL
L3482	low-density lipoprotein from human plasma, DiI complex (DiI LDL) *1 mg/mL*	200 μL
L3483	low-density lipoprotein from human plasma, BODIPY® FL complex (BODIPY® FL LDL) *1 mg/mL*	200 μL
L3484	low-density lipoprotein from human plasma, acetylated, DiI complex (DiI AcLDL) *1 mg/mL*	200 μL
L3485	low-density lipoprotein from human plasma, acetylated, BODIPY® FL conjugate (BODIPY® FL AcLDL) 1 mg/mL*	200 μL
L3486	low-density lipoprotein from human plasma (LDL) *2.5 mg/mL*	200 μL
L35353	low-density lipoprotein from human plasma, acetylated, Alexa Fluor® 594 conjugate (Alexa Fluor® 594 AcLDL) *1 mg/mL*	200 μL
L35354	low-density lipoprotein from human plasma, acetylated (AcLDL) *2.5 mg/mL*	200 μL
O23020	ovalbumin, fluorescein conjugate	5 mg
T13342	transferrin from human serum, Alexa Fluor® 488 conjugate	5 mg
T13343	transferrin from human serum, Alexa Fluor® 594 conjugate	5 mg
T23362	transferrin from human serum, Alexa Fluor® 633 conjugate	5 mg
T23363	transferrin from human serum, biotin-XX conjugate	5 mg
T23364	transferrin from human serum, Alexa Fluor® 546 conjugate	5 mg
T23365	transferrin from human serum, Alexa Fluor® 568 conjugate	5 mg
T23366	transferrin from human serum, Alexa Fluor® 647 conjugate	5 mg
T2871	transferrin from human serum, fluorescein conjugate	5 mg
T2872	transferrin from human serum, tetramethylrhodamine conjugate	5 mg
T2875	transferrin from human serum, Texas Red® conjugate	5 mg
T35352	transferrin from human serum, Alexa Fluor® 555 conjugate	5 mg
T35357	transferrin from human serum, Alexa Fluor® 680 conjugate	5 mg