エンドサイトーシスと食作用

食細胞における酸化的バースト（活性酸素発生）のモニタリング

細胞内活性酸素生成

InvitrogenのFc OxyBURST® Greenアッセイ試薬は、フローサイトメトリーとマイクロプレート分析により、食細胞における酸化的バースト(活性酸素発生)をモニターするために開発されました。Fc OxyBURST® Greenアッセイ試薬はジクロロジヒドロフルオレセイン(H₂DCF)と共有結合させたウシ血清アルブミン(BSA)から構成されており、精製ウサギ抗BSAポリクローナル抗体と複合体を形成します。これらの免疫複合体がBSA抗体のFc領域を介してFc受容体に結合すると、非蛍光H₂DCF分子が食胞内に取り込まれ、酸化されて緑色蛍光産物になります。

細胞外活性酸素生成

OxyBURST® Green H₂HFF BSA試薬は、オレゴングリーン488色素の還元型とコンジュゲートしたBSAを用いており、抗体成分を持たないことを除き、Fc OxyBURST®試薬に似ています。OxyBURST® Green H₂HFF BSAは細胞内に入らず、そのため活性酸素の細胞外への漏出をモニターする上ですぐれたプローブです。

酸化-感受性コンジュゲートの作成

アミン反応性OxyBURST® Green H₂DCFDAサクシニミジルエステルを用いて、抗体、抗原、ペプチド、タンパク質、デキストラン、細菌、酵母、ポリスチレンマイクロスフェアなど、さまざまな生体分子や粒子の酸化感受性コンジュゲートを作製することができます。他のOxyBURST®試薬と同様に、フローサイトメーターやマイクロプレート用のフルオロメーターでフルオレセイン(FITC)と同様の波長やフィルターを用いて蛍光の増加をモニターすることによりコンジュゲートの酸化を検出できます。

ジクロロジヒドロフルオレセイン二酢酸(H₂DCFDA)と未標識免疫複合体を同時に投与した、またはFc OxyBURST® Greenアッセイ試薬(H₂DCF-BSA免疫複合体)を投与したヒト好中球の蛍光。Fc OxyBURST® Green試薬の蛍光はH₂DCFDAの蛍光より大きいことに注目。このフローサイトメトリーデータはボストン大学のElizabeth Simons氏からの提供¹。

Fc受容体を介した食作用経路を蛍光検出するFc OxyBURST®試薬。ジクロロジヒドロフルオレセイン(H₂DCF)がBSAと共有結合しており、ウサギ抗BSAポリクローナル抗体と複合体を形成する。Fc受容体に結合すると非蛍光免疫複合体は取り込まれて酸化され、蛍光DCFになる。

参考文献：

1. J Immunol Methods 130, 223 (1990).

製品：

Cat.No.	製品名	サイズ
D2935	2',7'-dichlorodihydrofluorescein diacetate, succinimidyl ester (OxyBURST® Green H2DCFDA, SE)	5 mg
F2902	Fc OxyBURST® Green assay reagent *25 assays* *3 mg/mL*	500 μL
O13291	OxyBURST® Green H2HFF BSA *special packaging*	5 x 1 mg