フローサイトメトリー用製品
細胞増殖アッセイ
細胞の個体群の増殖状態は、生細胞機能の研究、特に癌や創薬研究では重要なパラメーターです。Invitrogenは、フローサイトメトリー用途に適した蛍光製品を提供しています。
その他の細胞増殖アッセイに関する製品は、「細胞増殖および生存率用ツール」の章を参照ください。
BrdU取り込みを検出する優れた方法
細胞増殖をアッセイする従来のBrdUに基づくプロトコールの多くでは、取り込んだBrdUを露出させるためにDNAを変性させる必要があります。しかし、このような厳しい処理を行うと、抗原や他の細胞構造が十分に保存されないため、続けて別の染色を行うのがしばしば困難な場合があります。一方、ABSOLUTE-S SBIP細胞増殖アッセイキットはSBIP(Strand Break Induction by Photolysis, 光分解誘発性鎖切断)法を取り入れています。これを用いると、以下のようなことが可能になります。
- 細胞の特徴と抗原部位の維持が良好です。
- DNAを変性させるための酸性洗浄を行う必要がありません。
- 低いレベルのシグナルが増感されます。
Alexa Fluor® 488標識 抗BrdU抗体コンジュゲートを用いると、高感度で検出することができます。
多世代の細胞分裂の追跡
数回の細胞分裂による細胞増殖の研究には、当社のアミン反応性トレーサーのひとつをお選びください。これらプローブは、タンパク質や他のアミン含有生体分子と反応すると、細胞に良好に保持され、アルデヒドベースの固定液を用いて間接的に固定することができます。これは、下記のような共通の特長があります。
- 生細胞膜を通って自由に拡散します。
- 細胞内と細胞外のどちらにも存在する利用可能なアルキル第1級アミンと反応するサクシニミジルエステル(SE)を含んでいます。
- トレーサーのほとんどは、酢酸エステルが細胞内エステラーゼよって切断され、非常に蛍光の強いアミン反応性フルオロフォアが生成するまでは無色で蛍光を発しません。
- 細胞内タンパク質のアミン含有残基と反応すると、細胞内で良好に保持される色素タンパク質付加体を生成します。これらプローブは、例えば胚発生時のように、細胞が移動して分裂する時も保持されます。1, 2
当社では、カルボキシフルオレセイン・ジアセテート(CFSE)とオレゴングリーン488カルボン酸ジアセテート(DFFDA、SE)両方のサクシニミジルエステルを粉末で提供しています。便利なCellTrace™ CFSE細胞増殖キットには、色素調製用に50 μgずつに分注された10バイアルのCFSE色素、高品質DMSO、フローサイトメトリーを使用する細胞トレーシング実験用プロトコールが含まれています。
その他のトレーシング試薬に関する詳細は「細胞トレーシング」の章を参照ください。
ヒト末梢血リンパ球を採取し、第0日にCellTrace™オレゴングリーン488で染色した。マイトマイシンCを用いて親世代で細胞群の一部の増殖を停止した(赤色ピーク)。試料の残りは、フィトヘムアグルチニンで刺激し、5日間増殖させた。緑色ピークは次世代の細胞群を表す。
Invitrogenのアミン反応性細胞トレーサー
| アミン反応性細胞トレーサー |
Ex/Em* |
備考 |
Cat.No. |
| * 脱エステル化された細胞トレーサーのおよその最大励起波長(Ex)と最大蛍光波長(Em)(nm)。値は細胞環境によってやや変動すると思われる。†pH依存性スペクトル、スペクトルはpH>9で測定。 |
カルボキシフルオレセイン・
ジアセテート、サクシニミジルエステル
(CFDA SE;CFSE) |
492/517 † |
- pH6.8以下ではCFSE色素の蛍光は消光する
- 1本入りで販売
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C1157 |
Vybrant®
CFDA SE Cell トレーサーキット |
492/517 † |
- pH6.8以下ではCFSE色素の蛍光は消光する
- キットにはDMSOと各500 μgの色素10バイアルを含む。
- 色素の有効期限の延長
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V12883 |
CellTrace™ CFSE細胞増殖キット
(CFSE色素含有) |
492/517 † |
- pH6.8以下では消光するCFSE色素の蛍光
- キットにはDMSOと各50 μgの色素10バイアルを含む。
- 色素の有効期限の延長
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C34554 |
CellTrace™
オレゴングリーン488カルボン酸
ジアセテート、サクシニミジルエステル
(カルボキシ-DFFDA SE) |
492/518 |
- 生理学的pH(pKa〜4.7)では消光しないDFFDA SEの蛍光
- 色素は50 μgずつのバイアルになっている。
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C34555 |
- 参考文献：
- 1. J Cell Biol 101, 610 (1985); 2. J Cell Biol 103, 2649 (1986).
製品：
| Cat.No. |
製品名 |
サイズ |
| A23150 |
ABSOLUTE-S™ SBIP Cell Proliferation Assay Kit *with Alexa Fluor® 488 anti-BrdU* *50 assays* |
1 kit |
| C1157 |
5-(and-6)-carboxyfluorescein diacetate, succinimidyl ester (5(6)-CFDA, SE; CFSE) *mixed isomers* |
25 mg |
| C34554 |
CellTrace™ CFSE Cell Proliferation Kit *for flow cytometry* |
1 kit |
| C34555 |
CellTrace™ Oregon GreenR 488 carboxylic acid diacetate, succinimidyl ester (carboxy-DFFDA, SE) *cell permeant* *mixed isomers* |
20 x 50 μg |
| V12883 |
Vybrant® CFDA SE Cell Tracer Kit |
1 kit |
