フローサイトメトリー用製品

フィコビリタンパク質（PEやAPC）とのタンデムコンジュゲート

InvitrogenのR-フィコエリスリン(R-PE)・アロフィコシアニン(APC)タンデム抗体コンジュゲートは、現在、フローサイトメトリーに使用することができる数種類の最良の色素を組み込んでいます。このコンジュゲートは、高感度もしくは同時多色検出を必要とする幅広い用途に対して、最小のバックグラウンドで強力な蛍光シグナルを提供します。Alexa Fluor®色素標識フィコビリタンパク質タンデムコンジュゲートは、非常に優れた蛍光共鳴エネルギートランスファー(FRET)特性を示し、適応する波長を持つ色素と組み合わせると、ひとつの励起光源によって励起して、多数のターゲットを同時に標識し、検出することができます。これらコンジュゲートの交差吸収に関してはレファレンスCをご参照ください。

遊離ストレプトアビジン(赤色曲線、280 nmの吸収によって検出)とR-フィコエリスリンストレプトアビジン(青色曲線、565 nmの吸収によって検出)のサイズ排除クロマトグラム分析。R-フィコエリスリンコンジュゲートには実質的に非コンジュゲートストレプトアビジンが含まれないことを示す。

二次抗体コンジュゲート

R-フィコエリスリンおよびアロフィコシアニン標識二次抗体

色素 (Ex/Em *)	Goat Anti- Mouse IgG	Goat Ant- Rabbit IgG
* ：およその最大励起波長(Ex)と最大蛍光波長(Em)(nm) †：複数の励起ピーク ‡：ヤギ抗マウスIgG1、 §：ヤギ抗マウスIgG2a、 **：ヤギ抗マウスIgG2b
R-phycoerythrin (496, 546, 565 †/578)	P852 P21129 ‡ P21139 § P21149 **	P2771MP
Allophycocyanin (650/660)	A865	A10931
Alexa Fluor® 610-R-phycoerythrin (496, 546, 565 †/630) tandem	A20980	A20981
Alexa Fluor® 647-R-phycoerythrin (496, 546, 565 †/668) tandem	A20990	A20991
Alexa Fluor® 680-R-phycoerythrin (496, 546, 565 †/702) tandem	A20983	A20984
Alexa Fluor® 680-allophycocyanin (650/702) tandem	A21000	A21001MP
Alexa Fluor® 750-allophycocyanin (650/775) tandem	A21006

ビオチン結合タンパク質の蛍光コンジュゲート

ストレプトアビジンのR-フィコエリスリン(R-PE)やB-フィコエリスリン(B-PE)コンジュゲートは、あらゆるアビジンコンジュゲートの中で最も強力な蛍光を発します。当社のR-PEやB-PEのストレプトアビジンコンジュゲートは、全ての非コンジュゲートストレプトアビジンが確実に取り除かれるように精製されているので、多色フローサイトメトリーでは特に重要な標識としてお使いいただけます。

当社では、R-PEを当社のAlexa FlourR色素のうちの4種(Alexa Fluor® 610色素、Alexa Fluor® 647色素、Alexa Fluor® 680色素、Alexa Fluor® 750色素)とコンジュゲートし、次にこれら蛍光タンパク質をストレプトアビジンにコンジュゲートして、アルゴンイオンレーザーの488 nmスペクトル線で励起することができる標識コンジュゲートを合成しました。 長波長の最大蛍光は、Alexa Fluor® 610標識R-PEコンジュゲートでは630 nm、Alexa Fluor® 647標識R-PEコンジュゲートでは667 nm、Alexa Fluor® 680標識R-PEコンジュゲートでは702 nm、Alexa Fluor® 750標識R-PEコンジュゲートでは771 nmです。Alexa Fluor® 610標識R-PEコンジュゲートの蛍光は、R-PEのテキサスレッドコンジュゲートに比べると約17 nm長波長側にシフトしています。 Alexa Fluor® 647標識R-PEタンデムコンジュゲートのスペクトルは、R-PEのCy™5コンジュゲートと実際に同じスペクトルを示しますが、蛍光は約3倍です。このようなタンデムコンジュゲートは、ひとつの励起光源を用いて同時に4色の標識に使用することができます。さらに、当社ではアロフィコシアニン(APC)をAlexa Fluor® 680色素、Alexa Fluor® 700色素、Alexa Fluor® 750色素と反応させ、この標識をストレプトアビジンにコンジュゲートしました。 生じたプローブは全て、633 nmにてHe-Neレーザーで、もしくは647 nmにてクリプトンイオンレーザーで励起することができ、蛍光スペクトルを区別することができます。InvitrogenのAPCコンジュゲートは、化学的に架橋させたアロフィコシアニンなので、高度に希釈した時や強力なカオトロピック塩が存在する時でも、この分子が解離するのを防いでいます。

ストレプトアビジン標識蛍光試薬

色素	Ex/Em *	Streptavidin
* ：およその最大励起波長(Ex)と最大蛍光波長(Em)(nm) † ：複数の励起ピーク ‡ ：この製品はすべての結合していないストレプトアビジンとほとんど全ての結合していないフィコビリタンパク質とを取り除くために高度に精製されている
R-phycoerythrin	496, 546, 565 †/578	S866, S21388 ‡
Allophycocyanin	650/660	S868, S32362 ‡
B-phycoerythrin	546, 565 †/575	S32350
Alexa Fluor® 610-R-phycoerythrin tandem	496, 546, 565 †/630	S20982
Alexa Fluor® 647-R-phycoerythrin tandem	496, 546, 565 †/667	S20992
Alexa Fluor® 680-R-phycoerythrin tandem	496, 546, 565 †/702	S20985
Alexa Fluor® 750-R-phycoerythrin tandem	496, 546, 565 †/771	S32363
Alexa Fluor® 680-allophycocyanin tandem	650/702	S21002
Alexa Fluor® 700-allophycocyanin tandem	650/723	S21005
Alexa Fluor® 750-allophycocyanin tandem	650/775	S21008

1)Alexa Fluor® 488ヤギ抗マウスIgG抗体、2)R-フィコエリスリン ヤギ抗マウスIgG抗体、3)Alexa Fluor® 610-R-フィコエリスリン ヤギ抗マウスIgG抗体、4)Alexa Fluor® 647-R-フィコエリスリン ヤギ抗マウスIgG抗体の正規化した蛍光スペクトル、5)Alexa Fluor® 680-R-フィコエリスリン ヤギ抗マウスIgG抗体の正規化した蛍光スペクトル。タンデムコンジュゲートは、同時に多重染色が可能であり、ひとつの励起光源(アルゴンイオンレーザーの488 nmスペクトル)で5個までのターゲットを検出することができる。

Alexa Fluor® 610標識R-フィコエリスリンストレプトアビジン(赤色)とテキサスレッド-R-フィコエリスリンストレプトアビジン(C社製、青色)タンデムコンジュゲートの蛍光スペクトル。図Aは、励起波長(488 nm)にて等しい吸光度で調製された試料に対する相対蛍光強度スケールでスペクトルを比較して示す。図Bは、同じデータを同じピーク強度に正規化し、スペクトルプロフィルの比較を容易にしたものである。

1)ヤギ抗マウスIgG抗体と架橋させたアロフィコシアニン、2)Alexa Fluor® 680-アロフィコシアニン ヤギ抗マウスIgG抗体、3)Alexa Fluor® 750ヤギ抗マウスIgG抗体の正規化した蛍光スペクトル。タンデムコンジュゲートは、同時に多重染色が可能であり、ひとつの励起光源(He-Neレーザーの633 nmスペクトル線)で3個までのターゲットを検出することができる。

Alexa Fluor® 647標識R-フィコエリスリン ストレプトアビジン(赤色)とCy™5標識R-フィコエリスリン ストレプトアビジン(C社製、青色)タンデムコンジュゲートの蛍光スペクトル。図Aは、励起波長(488 nm)にて等しい吸光度になるように調製された試料に対する相対蛍光強度スケールでスペクトルを比較して示す。図Bは、同じデータを同じピーク強度に正規化し、スペクトルプロフィルの比較を容易にしたものである。

製品：

Cat.No.	製品名	サイズ
A10931	allophycocyanin, crosslinked, goat anti-rabbit IgG (H+L) *1 mg/mL*	0.5 mL
A20980	Alexa Fluor® 610-R-phycoerythrin goat anti-mouse IgG (H+L) *1 mg/mL*	100 μL
A20981	Alexa Fluor® 610-R-phycoerythrin goat anti-rabbit IgG (H+L) *1 mg/mL*	100 μL
A20983	Alexa Fluor® 680-R-phycoerythrin goat anti-mouse IgG (H+L) *1 mg/mL*	100 μL
A20984	Alexa Fluor® 680-R-phycoerythrin goat anti-rabbit IgG (H+L) *1 mg/mL*	100 μL
A20990	Alexa Fluor® 647-R-phycoerythrin goat anti-mouse IgG (H+L) *1 mg/mL*	100 μL
A20991	Alexa Fluor® 647-R-phycoerythrin goat anti-rabbit IgG (H+L) *1 mg/mL*	100 μL
A21000	Alexa Fluor® 680-allophycocyanin goat anti-mouse IgG (H+L) *1 mg/mL*	100 μL
A21001MP	Alexa Fluor 680-allophycocyanin goat anti-rabbit IgG (H+L)	100 μL
A21006	Alexa Fluor® 750-allophycocyanin goat anti-mouse IgG (H+L) *1 mg/mL*	100 μL
A865	allophycocyanin, crosslinked, goat anti-mouse IgG (H+L) *1 mg/mL*	0.5 mL
P21129	R-phycoerythrin goat anti-mouse IgG1 (g1) conjugate *1 mg/mL*	250 μL
P21139	R-phycoerythrin goat anti-mouse IgG2a (g2a) conjugate *1 mg/mL*	250 μL
P21149	R-phycoerythrin goat anti-mouse IgG2b (g2b) conjugate *1 mg/mL*	250 μL
P2771MP	R-phycoerythrin goat anti-rabbit IgG (H+L) *1 mg/mL*	0.5 mL
P852	R-phycoerythrin goat anti-mouse IgG (H+L) *1 mg/mL*	1 mL
S20982	streptavidin, Alexa Fluor® 610-R-phycoerythrin conjugate (Alexa Fluor® 610-R-phycoerythrin streptavidin) *1 mg/mL*	100 μL
S20985	streptavidin, Alexa Fluor® 680-R-phycoerythrin conjugate (Alexa Fluor® 680-R-phycoerythrin streptavidin) *1 mg/mL*	100 μL
S20992	streptavidin, Alexa Fluor® 647-R-phycoerythrin conjugate (Alexa Fluor® 647-R-phycoerythrin streptavidin) *1 mg/mL*	100 μL
S21002	streptavidin, Alexa Fluor® 680-allophycocyanin conjugate (Alexa Fluor® 680-allophycocyanin streptavidin) *1 mg/mL*	100 μL
S21005	streptavidin, Alexa Fluor® 700-allophycocyanin conjugate (Alexa Fluor® 700-allophycocyanin streptavidin) *1 mg/mL*	100 μL
S21008	streptavidin, Alexa Fluor® 750-allophycocyanin conjugate (Alexa Fluor® 750-allophycocyanin streptavidin) *1 mg/mL*	100 μL
S21388	streptavidin, R-phycoerythrin conjugate *premium grade* *1 mg/mL*	1 mL
S32350	streptavidin, B-phycoerythrin conjugate *1 mg/mL*	1 mL
S32362	streptavidin, allophycocyanin conjugate *premium grade* *1 mg/mL*	250 μL
S32363	streptavidin, Alexa Fluor® 750-R-phycoerythrin conjugate (Alexa Fluor® 750-R-phycoerythrin streptavidin)	100 μL
S866	streptavidin, R-phycoerythrin conjugate *1 mg/mL*	1 mL
S868	streptavidin, allophycocyanin, crosslinked, conjugate *1 mg/mL*	0.5 mL