フローサイトメトリー用製品
生存率と細胞毒性アッセイ
LIVE/DEAD®生存率アッセイキットには、多数の生細胞と死細胞を蛍光に基づいて評価するための試薬と簡単なプロトコールが含まれています。当社のアッセイキットは全て、膜完全性を生存率の測定値として使用しています。
LIVE/DEAD® キット
| キット名 |
生細胞染色 |
死細胞染色 |
励起 |
固定 |
Cat.No. |
| (「細胞増殖および生存率用ツール」の章の細胞生存率の節もご参照ください) |
| LIVE/DEAD® Viability/Cytotoxicity Kit *for animal cells* *1000 assays* |
Calcein AM |
Ethidium Homodimer-1 |
488 nm |
不可 |
L3224 |
| LIVE/DEAD® Cell-Mediated Cytotoxicity Kit *for animal cells* *2000 assays* |
DiOC18(3) |
Propidium Iodide |
488 nm |
不可 |
L7010 |
| LIVE/DEAD® Reduced Biohazard Cell Viability Kit #1 *green and red fluorescence* *100 assays* |
SYTO®10 dye |
DEAD Red™
(Ethidium Homodimer-2) |
488 nm |
可能 |
L7013 |
| LIVE/DEAD® Reduced Biohazard Cell Viability Kit #2 *green fluorescence* *200 assays* |
Blue Dye
薄暗い |
Blue Dye
明るい |
488 nm |
可能 |
L23101 |
| LIVE/DEAD® Reduced Biohazard Cell Viability Kit #3 *red fluorescence* *200 assays* |
Red Dye
薄暗い |
Red Dye
明るい |
488 nm |
可能 |
L23102 |
| LIVE/DEAD® Reduced Biohazard Cell Viability Kit #4 *blue fluorescence* *200 assays* |
Green Dye
薄暗い |
Green Dye
明るい |
UV |
可能 |
L23105 |
| LIVE/DEAD® Sperm Viability Kit*200-1000 assays* |
SYBRR14 dye |
Propidium Iodide |
488 nm |
不可 |
L7011 |
汎用生存率アッセイ
LIVE/DEAD®生存率/細胞毒性キットに含まれている蛍光プローブのカルセインAMとエチジウムホモダイマー1(EthD-1)を用いると、細胞毒性現象を正確にアッセイすることができます。このアッセイはトリパンブルーを用いるアッセイよりも信頼性が高く、51Cr-放出アッセイよりも迅速で安全です。このキットは使用法が簡単なので、ハイスループットスクリーニングに適しています。生細胞は細胞内に普遍的なエステラーゼ活性の存在によって区別され、非蛍光細胞透過性カルセインが強力な蛍光カルセインへと酵素的に変換されることによって同定されます。ポリアニオン色素であるカルセインは、生細胞内に十分に保持され、生細胞では強い均一な緑色蛍光を発します(ex/em〜495 nm/〜515 nm)。EthD-1は、膜が損傷した細胞内に入り込み、核酸と結合すると蛍光が40倍増大します。これによって、死細胞では明るい赤色蛍光が認められます(ex/em〜495 nm/〜635 nm)。EthD-1は生細胞の無傷の原形質膜によって排除されます。この色素は細胞と相互作用する前は、事実上蛍光を発しないので、このアッセイ法では、バックグラウンド蛍光レベルは本質的に低くなります。
LIVE/DEAD®生存率/細胞毒性キットを用いたフローサイトメトリーによる生存率アッセイ。ヒトB細胞の生細胞:エタノール固定細胞1:1混合物をカルセインAMとエチジウムホモダイマー1で染色した。488 nmで励起し分析すると、緑色蛍光(530 nm)生細胞群と赤色蛍光(585 nm)死細胞群が明確に分離していることがわかる。
細胞媒介性細胞傷害アッセイ
LIVE/DEAD®細胞媒介性細胞傷害キットを使用すると、放射性プローブを使用した時に生じる危険や廃棄の問題が生じることなく、何時間にもわたって試料の細胞媒介細胞傷害をモニターすることができます。このキットは実績のある2色蛍光アッセイに基づいており、従来の51Cr放出細胞媒介性細胞傷害(CMC)アッセイを用いて得られる結果と非常に相関した結果が得られます。標的細胞とエフェクター細胞を区別するために、培養標的細胞の物を、緑色蛍光膜染色剤である3,3'-ジオクタデシロキサカルボシアニン(DiOC18(3)またはDiO)で一晩標識します。次に標的細胞からDiOC18(3)を洗い流し、様々な割合でエフェクター細胞と組み合わせます。
標的細胞をエフェクター細胞と共にインキュベートしてから、膜非透過性の核酸染色剤であるプロピジウムアイオダイドを加えて、原形質膜が損傷した細胞を全て標識します。標的細胞は緑色蛍光膜染色剤を保持するので、エフェクター細胞の生細胞と死細胞、標的細胞の生細胞と死細胞をどちらも容易にフローサイトメトリーで区別することができます。標的細胞の死細胞では緑色膜染色と赤色核染色が同時に認められますが、エフェクター細胞の死細胞では赤色核染色しか認められません。
LIVE/DEAD® reducedバイオハザード細胞生存率キット#2を用いるフローサイトメトリーによって区別した生細胞と死細胞。画像は、健常な培養液(上図)、長期培養液(中央図)、加熱による死滅培養液(下図)から回収し、染色、固定したJurkat細胞の生細胞と死細胞である。非固定細胞を用いてもほぼ同じ結果が得られた(データ未公表)。
病原性試料の生存率アッセイ
LIVE/DEAD® reducedバイオハザードキットを用いると、染色剤と染色パターンを失うことなく、病原体を含む試料を固定することができます。あるいは、実験中どのタイミングでも細胞を固定することができ、数時間後まで分析することができるので、その後の分析ではより安全に取り扱うことができます。LIVE/DEAD® reducedバイオハザードキット#1には、膜透過性核酸染色剤SYTO® 10色素とDEADレッド(エチジウムホモダイマー2)染色剤が含まれています。SYTO® 10色素は、全細胞を緑色蛍光で染色し、DEADレッド染色剤は原形質膜が損傷を受けている細胞を赤色蛍光でマークします。キット#2、#3、#4にはそれぞれ、緑色蛍光色素、赤色蛍光色素、青色蛍光色素が含まれています。膜が損傷を受けている細胞では、色素は細胞表面上のアミンおよび細胞内のアミンと反応し、細胞内染色強度が強くなります。膜が無傷の細胞では、細胞表面のアミンと反応した後、色素は弱い細胞外蛍光しか示しません。キット#2および#3で標識した細胞は、アルゴンイオンレーザーの488 nm線によって励起することができますが、キット#4の色素はUV励起を必要とします。
LIVE/DEAD® reducedバイオハザード細胞生存率キット#2の原理。生細胞(上図)は表面上のみのキットの緑色蛍光反応性色素と反応し、細胞は弱い蛍光を発する。膜が損傷を受けている細胞(下図)は細胞全体で反応し、細胞は明るく染色される。LIVE/DEAD® reducedバイオハザード細胞生存率キット#3は、赤色蛍光反応性色素を使用している点以外はキット#2と同じである。LIVE/DEAD® reducedバイオハザード細胞生存率キット#4は青色蛍光色素を使用している。
精子細胞の生存率測定
LIVE/DEAD®精子生存率キットには、膜透過性核酸染色剤SYBRR 14色素と従来の死細胞染色剤のプロピジウムアイオダイドが含まれています。LIVE/DEAD®精子生存率キットに含まれている色素は、従来の染色剤よりも迅速に細胞を標識します。アッセイは5〜10分で完了します。どちらの色素もDNAを標識するので、別々の細胞成分をターゲットとすることで生じる曖昧さが除かれます。さらに、この組み合わせの色素を使用すると、可視光励起によって生細胞と死細胞を区別することができるので、有害なUVにさらされることが回避できます。ウシの精子をこれらふたつの染色剤と共に短期間インキュベートすると、細胞膜が傷のついていない精子生細胞は明るい緑色の蛍光を発し、細胞膜が損傷を受けている細胞は赤色の蛍光を発します。
製品：
| Cat.No. |
製品名 |
サイズ |
| L23101 |
LIVE/DEAD® Reduced Biohazard Cell Viability Kit #2 *green fluorescence* *200 assays* |
1 kit |
| L23102 |
LIVE/DEAD® Reduced Biohazard Cell Viability Kit #3 *red fluorescence* *200 assays* |
1 kit |
| L23105 |
LIVE/DEAD® Reduced Biohazard Cell Viability Kit #4 *blue fluorescence* *200 assays* |
1 kit |
| L3224 |
LIVE/DEAD® Viability/Cytotoxicity Kit *for animal cells* *1000 assays* |
1 kit |
| L7010 |
LIVE/DEAD® Cell-Mediated Cytotoxicity Kit *for animal cells* *2000 assays* |
1 kit |
| L7011 |
LIVE/DEAD® Sperm Viability Kit *200-1000 assays* |
1 kit |
| L7013 |
LIVE/DEAD® Reduced Biohazard Cell Viability Kit #1 *green and red fluorescence* *100 assays* |
1 kit |
