オルガネラと細胞骨格
リソソームとペルオキシゾーム
リソソーム
リソソームは酸性の小胞で、グリコシダーゼ、酸性ホスファターゼ、エラスターゼ、カテプシン、カルボキシペプチダーゼ、その他のプロテアーゼを含んでいます。これらの酵素はタンパク質や受容体の細胞内輸送に必要なさまざまな加水分解反応に関与しています。LysoTracker®プローブは蛍光酸性(fluorescent acidotropic)プローブで、中性pHでは部分的にしかプロトン化されない弱い塩基と結合したフルオロフォアから構成されています。これらのプローブは生細胞に自由に透過し、酸性のオルガネラでナノモル濃度で凝集するのでエンドソームやリソソームなどの構造物の標識と追跡にお使いいただけます。これらのプローブは酸性オルガネラにきわめて選択的、生細胞をナノモル濃度で効率的に標識するなど、いくつかの重要な特徴を備えています。さらに、LysoTracker®プローブにはいくつかの蛍光標識したものが販売されているので、多色蛍光を利用したアプリケーションに適しています。
生細胞におけるリソソームの発生や機能の動的側面の研究用に、当社ではプロトン化によって酸性オルガネラに取り込まれる蛍光pHインディケータのLysoSensor™プローブを開発しました。また、このプロトン化は弱塩基性側鎖による色素の蛍光消光を和らげるので蛍光強度が上昇します。このため、酸性pHでも蛍光の増強を示さないLysoTracker®プローブとは対照的に、LysoSensor™試薬は酸性化されるとpH依存的に蛍光強度が上昇します。
LysoTracker® Red DND-99およびMitoTracker® Green FMと同時インキュベートしたウシ肺動脈内皮細胞。固定後も細胞内でよく保持されていることに注意。画像はHuygensソフトウェア(Scientific Volume Imaging)を用いてデコンボリューションさせた。
LysoTracker® プローブとLysoSensor™プローブの比較
| 製品 |
用途 |
メカニズム |
| * LysoSensor™ Yellow/Blue Dextranコンジュゲートはフローサイトメトリーにも用いられる。 |
| LysoTracker®プローブ |
酸性オルガネラを標識して蛍光を画像化 |
蛍光強度がpH依存的に変化しない |
| LysoSensor™プローブ |
蛍光画像化における酸性オルガネラのpHを測定* |
蛍光強度がpH依存的に上昇する |
LysoTracker®プローブとLysoSensor™プローブの製品情報
| 製品 |
励起/蛍光* |
pKa |
Cat.No. |
備考 |
| * 水性バッファーまたはメタノール中の最大励起(Ex)および蛍光(Em)(nm); 細胞環境によって若干変動。†放出は環境にきわめて敏感; メタノール中の蛍光最大は576 nmだが染色されたリソソームは青白色を呈する。‡pH3。§pH7; この色素はpH-依存的な2重の励起/蛍光ピークをもつ。ND=測定せず。 |
LysoTracker®
プローブ |
373/422 (Blue DND-22)
465/535 (Yellow HCK-123)
504/511 (Green DND-26)
577/590 (Red DND-99) |
ND |
L7525
L12491
L7526
L7528 |
- 4種類の蛍光色が利用可能
- LysoTracker® Green DND-26は生細胞によってきわめて速やかに取り込まれる;色素添加後1〜5分で最高の画像
- LysoTracker® Red DND-99の染色パターンはアルデヒド固定後も保持される
|
| LysoSensor™ Blue DND-167 |
373/425 |
5.1 |
L7533 |
|
| LysoSensor™ Green DND-189 |
443/505 |
5.2 |
L7535 |
|
| LysoSensor™ Green DND-153 |
442/505 |
7.5 |
L7534 |
|
| LysoSensor™ Yellow/Blue DND-160 |
384, 329/540 ‡, 440 § |
3.9 |
L7545 |
- レシオメトリック(比率測定)画像解析に適したpH依存的な2重の励起/蛍光ピークをもつ
- 酸性オルガネラで黄色蛍光、酸性度の低いオルガネラで青色蛍光
- 色素添加後1〜5分で最高の画像
|
| LysoSensor™ Yellow/Blue Dextran, 10,000 |
381, 335/521 ‡, 452 § |
4.2 |
L22460 |
- 蛍光が青色(中性pH付近)から黄色(酸性コンパートメント)に変化
- 細胞非透過性; 微量注入またはエンドサイトーシスによりロード
- 顕微鏡およびフローサイトメトリーに対応する
|
ペルオキシゾーム
Invitrogenでは豊富なペルオキシゾーム組込み膜タンパク質PMP70に対するウサギポリクローナル抗体を提供しています1。当社の固定細胞染色用のSelectFX® Alexa Fluor® 488ペルオキシゾーム標識キットとして利用できます。キットには抗PMP70一次抗体に加えて洗浄バッファー、固定液、ブロッキング剤およびAlexa Fluor® 488ヤギ抗ウサギ二次抗体コンジュゲートが含まれています。
固定、浸透処理を行いSelectFX® Alexa Fluor® 488ペルオキシゾーム標識キットで染色したウシ肺動脈上皮細胞。抗PMP70(ペルオキシゾーム組込み膜タンパク質70)一次抗体はペルオキシゾームを標的とし、Alexa Fluor® 488色素コンジュゲート二次抗体で検出した(緑色蛍光)。MitoTracker® Red CMXRosはミトコンドリアを検出する。核はDAPIで対比染色した(青色蛍光)。
LysoSensor™ Yellow/Blue DND-160のpH依存的スペクトル反応:A)励起スペクトルおよびB)蛍光スペクトル。
- 参考文献：
- 1. Cell Biochem Biophys 32 Spring, 131 (2000).
製品：
| Cat.No. |
製品名 |
サイズ |
| L12491 |
LysoTracker® Yellow HCK-123 *1 mM solution in DMSO* *special packaging* |
20 x 50 μL |
| L22460 |
LysoSensor™ Yellow/Blue dextran, 10,000 MW, anionic, fixable |
5 mg |
| L7525 |
LysoTracker® Blue DND-22 *1 mM solution in DMSO* *special packaging* |
20 x 50 μL |
| L7526 |
LysoTracker® Green DND-26 *1 mM solution in DMSO* *special packaging* |
20 x 50 μL |
| L7528 |
LysoTracker® Red DND-99 *1 mM solution in DMSO* *special packaging* |
20 x 50 μL |
| L7533 |
LysoSensor™ Blue DND-167 *1 mM solution in DMSO* *special packaging* |
20 x 50 μL |
| L7534 |
LysoSensor™ Green DND-153 *1 mM solution in DMSO* *special packaging* |
20 x 50 μL |
| L7535 |
LysoSensor™ Green DND-189 *1 mM solution in DMSO* *special packaging* |
20 x 50 μL |
| L7545 |
LysoSensor™ Yellow/Blue DND-160 *1 mM solution in DMSO* *special packaging* |
20 x 50 μL |
| S34201 |
SelectFX™ Alexa Fluor® 488 Peroxisome Labeling kit |
1 kit |
