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細胞トレーシングツール
トレーシング用途の蛍光標識またはビオチン化デキストラン
デキストランは、中から高分子量で、水溶性に優れ、毒性の低い親水性多糖類です。デキストランは、生物には非常に稀なポリ-(α-D-1,6-グルコース)結合を持っているので、ほとんどの細胞グリコシダーゼによる分解に抵抗性を示すため、生物学的にはデキストランは不活性です。これはまた、免疫原性が低いという特徴があります。蛍光デキストラン、特にフルオレセインとローダミンのコンジュゲートは、細胞系譜をトレースするために広く使用されています1〜3。この手法では、デキストランを発達中の胚のひとつの細胞に微量注入すると、その細胞と娘細胞がどうなるかin vivoで追跡することができます。この伝統的な系譜トレーシングを行うために必要な試薬は、Invitrogenの便利なVybrant細胞系譜トレーシングキットに含まれています。アルデヒド固定可能なカスケードブルー標識デキストランをまず、必要な親細胞に注入します。分化後、低レベルのシグナルを、抗カスケードブルー抗体と当社のAlexa Fluor® 546色素にコンジュゲートした二次抗体によって増幅します。
幾つかの用途では、分析を行うために、デキストラントレーサーを続いてホルムアルデヒドまたはグルタルアルデヒドで処理する必要があります4、5。このような用途に対して、Invitrogenは、当社のデキストランコンジュゲートのほとんどに対して、「リジン固定可能な」製品を提供しています。このデキストランは、リジン残基と共有結合し、それによって、デキストラントレーサーは、アルデヒドを介した固定によって周囲の生体分子とコンジュゲートし、その後、免疫組織化学法や超微細構造法によって検出することができます。
デキストランの正味荷電は蛍光色素とコンジュゲートの調製法に依存しています。Invitrogenは、天然のデキストランをFITCのようなイソチオシアネート誘導体と反応させるのではなく、水溶性アミノデキストランを適切な色素のサクシニミジルエステルと反応させることによって、ほとんどのデキストランを調製しています。この方法を用いると、より優れたアミン選択性が得られ、アミド結合が得られます。これはイソチオシアネートから形成される対応するチオ尿素よりもやや安定性が高くなっています。ローダミングリーンとAlexa Fluor® 488のコンジュゲートを除き、色素をひとたび添加すると、デキストラン未反応のアミンがキャップされ、中性デキストランもしくは陰イオンデキストランが生成されます。ローダミングリーンとAlexa Fluor® 488デキストランの場合には、デキストラン上の未反応のアミンは色素コンジュゲート後にもキャップされません。Alexa Fluor®、カスケードブルー、ルシファーイエロー、フルオレセイン、オレゴングリーンデキストランは、もともと陰イオン性ですが、両性イオン性ローダミンB、テトラメチルローダミン、テキサスレッド色素で標識したデキストランのほとんどは本質的に中性です。
- 参考文献：
- 1. Nature 344, 431 (1990); 2. Science 252, 569 (1991); 3. Development 108, 581 (1990); 4. Brain Res 526, 127 (1990); 5. Brain Res Bull 25, 139 (1990).
背側の割球の系譜トレーシング。32細胞期のXenopus laevis胚の3つの背側の割球に蛍光デキストランコンジュゲートを注入した、第1の背側(A1)細胞に10,000 MWのリジン固定可能フルオレセインデキストランを注入し、第2の背側(B1)細胞に10,000 MWのリジン固定可能テキサスレッドデキストランを注入し、第3の背側(C3)細胞に10,000 MWのリジン固定可能カスケードブルーデキストランを注入した。ひとつの胚を固定し、色素注入後直ちに画像化した(左)。右側の画像は、同様に注入した胚を固定し、第10期に画像化したもの。画像は、Marie Vodicka氏(University of California, Berkeley)からの提供。
Vybrant細胞系譜トレーシングキットを用いて行ったアフリカツメガエル(Xenopus laevis)の胚における系譜トレーシング。8細胞期の胚に10,000 MWの陰イオン性リジン固定可能カスケードブルーデキストランを注入し、様々な段階まで発達させてから固定した。抗原として使用したカスケードブルー色素は、抗体で検出し、その後、Alexa Fluor 546色素にコンジュゲートした二次抗体で視覚化した。画像は、Paul Wilson氏(Cornell University Medical College, New York)およびGreg Cox(Invitrogen)からの提供。
下表はInvitrogenの蛍光標識およびビオチン化デキストランコンジュゲートの一部です。さまざまな分子量幅の50種類以上の製品を取り扱っております。詳細については、ハンドブックもしくは当社Webサイト(www.probes.com)をご覧ください。
ProLong Gold褪色防止試薬使用後の蛍光強度
ラベル
(Ex/Em) * |
3000 MW |
10,000 MW |
40,000 MW |
70,000 MW |
500,000 MW |
2,000,000 MW |
| Cascade Blue (400/420) |
D7132 †§ |
D1976 †§ |
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| Lucifer yellow (428/532) |
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D1825 †§ |
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| Alexa Fluor 488 (494/521) |
D34682 § |
D22910 ठ|
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| Oregon Green 488 (496/524) |
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D7170 §, D7171 †§ |
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D7172 §, D7173 †§ |
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| Fluorescein (494/518) |
D3305 §, D3306 †§ |
D1821 §, D1820 †§ |
D1844 §, D1845 †§ |
D1823 §, D1822 †§ |
D7136 †§ |
D7137 †§ |
| Fluorescein + biotin (494/518) |
D7156 †§ |
D7178 †§ |
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| Fluorescein + tetramethylrhodamine (494,555/520,575)** |
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D1951 § |
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| DMNB-caged fluorescein (494/518)§ |
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D3310 § |
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| DMNB-caged fluorescein + biotin (494/518) § |
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D7146 † |
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| Rhodamine Green (502/527) |
D7163 |
D7153 † |
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| BODIPY FL (505/513) |
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D7168 ‡ |
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| Tetramethylrhodamine (555/580) |
D3307 §, D3308 †§ |
D1816, D1817 †, D1868 ‡§ |
D1842 |
D1819, D1818 † |
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D7139 † |
| Alexa Fluor 546 (556/573) |
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D22911 ठ|
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| Alexa Fluor 555 (555/565) |
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D34679 ठ|
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| Tetramethylrhodamine + biotin (555/580) |
D7162 † |
D3312 † |
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| Rhodamine B (570/590) |
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D1824 |
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D1841 |
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| Alexa Fluor 568 (578/603) |
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D22912 ठ|
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| Alexa Fluor 594 (590/617) |
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D22913 ठ|
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| Texas Red (595/615) |
D3329, D3328 † |
D1828, D1863 † |
D1829 |
D1830, D1864 † |
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| Alexa Fluor 647 (650/668) |
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D22914 ठ|
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| Alexa Fluor 680 (679/702) |
D34681 § |
D34680 ठ|
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| Biotin (<300/none) |
D7135 † |
D1956 † |
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D1957 † |
D7142 † |
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| Amino (<300/none) |
D3330 |
D1860 |
D1861 |
D1862 |
D7144 |
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* およその最大励起(Ex)および蛍光波長(Em)(nm)。† リジンを含む"リジン固定可能"なデキストラン。‡ 遊離アミン(リジンではない)を含む"固定可能な"なデキストラン。両者はホルムアルデヒドもしくはグルタルアルデヒドでも固定可能。§ これらデキストランコンジュゲートは-1の荷電を持つ。
** これらコンジュゲートにはpHに感受性のあるフルオレセイン(Ex = 495, Em = 520 nm)とpHに感受性を示さないテトラメチルローダミン(Ex = 555, Em = 575 nm)のフルオロフォアを含む。 |
製品：
| Cat.No. |
製品名 |
サイズ |
| D1816 |
dextran, tetramethylrhodamine, 10,000 MW, neutral |
25 mg |
| D1817 |
dextran, tetramethylrhodamine, 10,000 MW, lysine fixable (fluoro-ruby) |
25 mg |
| D1818 |
dextran, tetramethylrhodamine, 70,000 MW, lysine fixable |
25 mg |
| D1819 |
dextran, tetramethylrhodamine, 70,000 MW, neutral |
25 mg |
| D1820 |
dextran, fluorescein, 10,000 MW, anionic, lysine fixable (fluoro-emerald) |
25 mg |
| D1821 |
dextran, fluorescein, 10,000 MW, anionic |
25 mg |
| D1822 |
dextran, fluorescein, 70,000 MW, anionic, lysine fixable |
25 mg |
| D1823 |
dextran, fluorescein, 70,000 MW, anionic |
25 mg |
| D1824 |
dextran, rhodamine B, 10,000 MW, neutral |
25 mg |
| D1825 |
dextran, lucifer yellow, 10,000 MW, anionic, lysine fixable |
25 mg |
| D1828 |
dextran, Texas Red, 10,000 MW, neutral |
25 mg |
| D1829 |
dextran, Texas Red, 40,000 MW, neutral |
25 mg |
| D1830 |
dextran, Texas Red, 70,000 MW, neutral |
25 mg |
| D1841 |
dextran, rhodamine B, 70,000 MW, neutral |
25 mg |
| D1842 |
dextran, tetramethylrhodamine, 40,000 MW, neutral |
25 mg |
| D1844 |
dextran, fluorescein, 40,000 MW, anionic |
25 mg |
| D1845 |
dextran, fluorescein, 40,000 MW, anionic, lysine fixable |
25 mg |
| D1860 |
dextran, amino, 10,000 MW |
1 g |
| D1861 |
dextran, amino, 40,000 MW |
1 g |
| D1862 |
dextran, amino, 70,000 MW |
1 g |
| D1863 |
dextran, Texas Red, 10,000 MW, lysine fixable |
25 mg |
| D1864 |
dextran, Texas Red, 70,000 MW, lysine fixable |
25 mg |
| D1868 |
dextran, tetramethylrhodamine, 10,000 MW, anionic, fixable |
25 mg |
| D1951 |
dextran, fluorescein and tetramethylrhodamine, 70,000 MW, anionic |
10 mg |
| D1956 |
dextran, biotin, 10,000 MW, lysine fixable (BDA-10,000) |
25 mg |
| D1957 |
dextran, biotin, 70,000 MW, lysine fixable (BDA-70,000) |
25 mg |
| D1976 |
dextran, Cascade Blue, 10,000 MW, anionic, lysine fixable |
25 mg |
| D22910 |
dextran, Alexa Fluor 488; 10,000 MW, anionic, fixable |
5 mg |
| D22911 |
dextran, Alexa Fluor 546; 10,000 MW, anionic, fixable |
5 mg |
| D22912 |
dextran, Alexa Fluor 568; 10,000 MW, anionic, fixable |
5 mg |
| D22913 |
dextran, Alexa Fluor 594; 10,000 MW, anionic, fixable |
5 mg |
| D22914 |
dextran, Alexa Fluor 647; 10,000 MW, anionic, fixable |
2 mg |
| D3305 |
dextran, fluorescein, 3000 MW, anionic |
10 mg |
| D3306 |
dextran, fluorescein, 3000 MW, anionic, lysine fixable |
10 mg |
| D3307 |
dextran, tetramethylrhodamine, 3000 MW, anionic |
10 mg |
| D3308 |
dextran, tetramethylrhodamine, 3000 MW, anionic, lysine fixable |
10 mg |
| D3310 |
dextran, DMNB-caged fluorescein, 10,000 MW, anionic |
5 mg |
| D3312 |
dextran, tetramethylrhodamine and biotin, 10,000 MW, lysine fixable (mini-ruby) |
10 mg |
| D3328 |
dextran, Texas Red, 3000 MW, lysine fixable |
10 mg |
| D3329 |
dextran, Texas Red, 3000 MW, neutral |
10 mg |
| D3330 |
dextran, amino, 3000 MW |
100 mg |
| D34679 |
dextran, Alexa Fluor 555; 10,000 MW, anionic, fixable
|
5 mg |
| D34680 |
dextran, Alexa Fluor 680; 10,000 MW, anionic, fixable
| 5 mg |
| D34681 |
dextran, Alexa Fluor 680; 3,000 MW, anionic
|
2 mg |
| D34682 |
dextran, Alexa Fluor 488; 3,000 MW, anionic |
2 mg |
| D7132 |
dextran, Cascade Blue, 3000 MW, anionic, lysine fixable |
10 mg |
| D7135 |
dextran, biotin, 3000 MW, lysine fixable (BDA-3000) |
10 mg |
| D7136 |
dextran, fluorescein, 500,000 MW, anionic, lysine fixable |
10 mg |
| D7137 |
dextran, fluorescein, 2,000,000 MW, anionic, lysine fixable |
10 mg |
| D7139 |
dextran, tetramethylrhodamine, 2,000,000 MW, lysine fixable |
10 mg |
| D7142 |
dextran, biotin, 500,000 MW, lysine fixable (BDA-500,000) |
10 mg |
| D7144 |
dextran, amino, 500,000 MW |
100 mg |
| D7146 |
dextran, DMNB-caged fluorescein and biotin, 10,000 MW, lysine fixable |
5 mg |
| D7153 |
dextran, Rhodamine Green, 10,000 MW, lysine fixable |
10 mg |
| D7156 |
dextran, fluorescein and biotin, 3000 MW, anionic, lysine fixable (micro-emerald) |
5 mg |
| D7162 |
dextran, tetramethylrhodamine and biotin, 3000 MW, lysine fixable (micro-ruby) |
5 mg |
| D7163 |
dextran, Rhodamine Green, 3000 MW |
5 mg |
| D7168 |
dextran, BODIPY FL, 10,000 MW, fixable |
5 mg |
| D7170 |
dextran, Oregon Green 488; 10,000 MW, anionic |
5 mg |
| D7171 |
dextran, Oregon Green 488; 10,000 MW, anionic, lysine fixable |
5 mg |
| D7172 |
dextran, Oregon Green 488; 70,000 MW, anionic |
5 mg |
| D7173 |
dextran, Oregon Green 488; 70,000 MW, anionic, lysine fixable |
5 mg |
| D7178 |
dextran, fluorescein and biotin, 10,000 MW, anionic, lysine fixable (mini-emerald) |
10 mg |
| V22915 |
Vybrant Cell Lineage Tracing Kit |
1 kit |
※価格は、左上のカタログ検索にカタログ番号を入力してご確認ください。
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