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細胞トレーシングツール
ニューロントレーシング用カルボシアニン膜色素
カルボシアニンは最も強力な光吸収色素で、いくつかの研究領域で有用なツールであることが証明されています。最も広く用いられているカルボシアニン膜プローブはオクタデシル(C18)インドカルボシアニンのDiIおよびDiD、オキサカルボシアニンのDiOです。DiOは緑色、DiIは橙赤色、DiDは近赤外の蛍光を放出します。当社のVybrant®マルチカラー細胞標識キットにはDiI、DiOおよびDiD色素各々の可溶化試料と細胞や組織を染色するためのプロトコールが含まれています。カルボシアニン色素は単品製品としてご購入いただくこともできます。
CM-DiIはチオール反応性クロロメチル成分を有するDiIの誘導体です。固定と浸透化段階の間、幾つかの細胞には十分に保持され、DiIよりもやや水溶性が高いので、細胞懸濁液と固定細胞用の染色溶液の調製が容易です。CM-DiIは当社のVybrant® CM-DiI細胞標識溶液とNeuroTrace® CM-DiI組織標識ペーストに含まれています。
カルボシアニン色素には下記のような特長があります。
- 外側に拡散し、細胞全体を染色します。
- 水中では弱い蛍光を発します。
- 吸光係数が高く、非常に明るいシグナルを発します。
- 細胞膜に良好に保持されます。
- 他の細胞にはほとんど移動しません。
Vybrant®標識溶液
Vybrant®ジカルボシアニン色素は色素デリバリー溶液に再懸濁できます。すなわち、通常の培地に直接加えるだけで、懸濁した培養細胞あるいは接着培養細胞を均一に標識することができます。当社では、DiO、DiI、CM-DiI、DiD色素溶液を個別に、あるいは Vybrant®マルチカラー細胞標識キットではDiO、DiI、DiD色素をセットで提供しています。
NeuroTrace®標識ペースト
NeuroTrace® DiO、DiI、CM-DiI、DiD組織標識ペーストは、それぞれDiO、DiI、CM-DiI、DiDを不活性な耐水ゲルに混合したものです。便利なNeuroTrace®マルチカラー組織標識キットでは、DiOペースト、DiIペーストおよびDiDペーストがセットとなっています。これらペーストは、供給されたままの状態ですぐに使用でき、針の先端を用いて、生検体や固定した組織検体を直接標識することができます。この使用方法では、色素の神経束への透過と、軸索の表面上と表面下両方の標識が改善されます。同様の状況に、色素結晶を直接適用したり、あるいは、濃縮溶液を微量注入した場合には、表面上のニューロンしか標識されません。また、この標識方法は、色素輸送率を50?80%上昇させることが明らかにされています。
- カルボシアニン色素の命名法
- インドカルボシアニンとオキサカルボシアニンは頭文字を取ってDiI、DiOと表記されますが、より詳細にはDiIC18(3)、DiOC18(3)と表記され、下付き数字は各アルキルテールの炭素原子の数、かっこ内の数字はインドリンまたはベンズオキサゾール環間の架橋の炭素原子の数を示しています。
逆行性輸送によって標識された新生マウスの視床底腹側核のニューロン。DiI(DiIC18(3)、緑色-疑似カラー)とDiD(DiIC18(5)、赤色-疑似カラー)のペア色素沈着物を注入し、固定し、インキュベートして、色素を逆行性輸送させた。画像は、Ariel Agmon氏(West Virginia University)からの提供。
生後1日のゼブラフィッシュ胚を、菱脳に挿入した微小電極を通してCellTracker® CM-DiIで染色した。続いて脳を固定し、切片化し、抗グリア抗体でインキュベートしフルオレセインヤギ抗マウスIgG抗体でインキュベートした。適切なフィルターを通して得られた重ねあわせ画像を示す。画像は、William Trevarrow氏(Beckman Institute, California Institute of Technology)からの提供。
FAST DiI™およびFAST DiO™色素
適用した場所からニューロン末端へ脂質親和性カルボシアニントレーサーが拡散するには数日から数週間かかります1。この拡散プロセスは、プローブのアルキルテールに不飽和を導入すると促進されるようです。InvitrogenのFAST DiI™色素2〜4とFAST DiO™色素5は、DiIとDiOの飽和したオクタデシルテール(C18:0)の代わりに二不飽和リノレイル(C18:2)テールを持っています。不飽和類似化合物の移動は、DiIとDiOの移動に比べると少なくとも50%速いと報告されています。
ニューロントレーシング用カルボシアニン膜色素
| 色素 | 励起/蛍光* | 色素の状態 | 固定†† |
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| Vybrant® 溶液† | NeuroTrace® Paste‡ | 油状§ | 固体** |
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* およその最大励起(Ex)蛍光(Em)(nm)。† Vybrant®シリーズの色素を適当な溶媒に溶解。プロトコール付き。‡NeuroTrace®色素は、不活性な水抵抗性のゲル中に混合。§室温で本質的に油状。#FAST DiI®とFAST DiO®色素にはDiIとDiOの飽和オクタデシル テール(C18:0)の代わりにdiunsaturated(二不飽和)リノレイル(C18:2)があります。**色素は固体で供給。溶媒は入っていない。††アルデヒド固定
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| DiI;DiIC18(3) | 549/565 | V22885 | N22880 |
| D282 D3911 | 不可 |
| CM-DiI | 553/570 | V22888 | N22883 |
| C7000 C7001 | 可能 |
| FAST DiI # |
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| D3899 | D7756 | 不可 |
| DiO;DiOC18(3) | 484/501 | V22886 | N22881 |
| D275 | 不可 |
| SP-DiOC18(3) | 497/513 |
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| D7778 | 可能 |
| FAST DiO # |
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| D3898 | 不可 |
| DiD;DiIC18(5) | 644/665 | V22887 | N22882 |
| D7757 | 不可 |
- 参考文献：
- 参考文献：
1. Trends Neurosci 12, 333 (1989); 2. Neuroreport 8, 3965 (1997); 3. Biophys J 70, 988 (1996); 4. J Cell Biol 134, 1427 (1996); 5. Neuron 17, 91 (1996).
製品：
| Cat.No. | 製品名 | サイズ |
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| C7000 | CellTracker™ CM-DiI *special packaging* | 20 x 50 μg |
| C7001 | CellTracker™ CM-DiI | 1 mg |
| D1125 | 3,3'-dihexadecyloxacarbocyanine perchlorate (DiOC16(3)) | 25 mg |
| D273 | 3,3'-dihexyloxacarbocyanine iodide (DiOC6(3)) | 100 mg |
| D275 | 3,3'-dioctadecyloxacarbocyanine perchlorate (DiO; DiOC18(3)) | 100 mg |
| D282 | 1,1'-dioctadecyl-3,3,3',3'-tetramethylindocarbocyanine perchlorate (DiI; DiIC18(3)) | 100 mg |
| D307 | 1,1'-dioctadecyl-3,3,3',3'-tetramethylindodicarbocyanine perchlorate (DiD oil; DiIC18(5) oil) | 25 mg |
| D378 | 3,3'-diheptyloxacarbocyanine iodide (DiOC7(3)) | 100 mg |
| D383 | 1,1'-didodecyl-3,3,3',3'-tetramethylindocarbocyanine perchlorate (DiIC12(3)) | 100 mg |
| D384 | 1,1'-dihexadecyl-3,3,3',3'-tetramethylindocarbocyanine perchlorate (DiIC16(3)) | 100 mg |
| D3886 | 1,1'-dioleyl-3,3,3',3'-tetramethylindocarbocyanine methanesulfonate (Δ9-DiI) | 25 mg |
| D3898 | 3,3'-dilinoleyloxacarbocyanine perchlorate (FAST DiO™ solid; DiOΔ9,12-C18(3), ClO4) | 5 mg |
| D3899 | 1,1'-dilinoleyl-3,3,3',3'-tetramethylindocarbocyanine perchlorate (FAST DiI™ oil; DiIΔ9,12-C18(3), ClO4) | 5 mg |
| D3911 | 1,1'-dioctadecyl-3,3,3',3'-tetramethylindocarbocyanine perchlorate (DiI; DiIC18(3)) *crystalline* | 25 mg |
| D7756 | 1,1'-dilinoleyl-3,3,3',3'-tetramethylindocarbocyanine, 4-chlorobenzenesulfonate (FAST DiI™ solid; DiIΔ9,12-C18(3), CBS) | 5 mg |
| D7757 | 1,1'-dioctadecyl-3,3,3',3'-tetramethylindodicarbocyanine, 4-chlorobenzenesulfonate salt (DiD solid; DiIC18(5) solid) | 10 mg |
| D7777 | 1,1'-dioctadecyl-6,6'-di(4-sulfophenyl)-3,3,3',3'-tetramethylindocarbocyanine (SP-DiIC18(3)) | 5 mg |
| D7778 | 3,3'-dioctadecyl-5,5'-di(4-sulfophenyl)oxacarbocyanine, sodium salt (SP-DiOC18(3)) | 5 mg |
| N22880 | NeuroTrace™ DiI tissue-labeling paste | 500 mg |
| N22881 | NeuroTrace™ DiO tissue-labeling paste | 500 mg |
| N22882 | NeuroTrace™ DiD tissue-labeling paste | 500 mg |
| N22883 | NeuroTrace™ CM-DiI tissue-labeling paste | 100 mg |
| N22884 | NeuroTrace™ Multicolor Tissue-Labeling Kit *DiO, DiI, DiD pastes, 500 mg each* | 1 kit |
| V22885 | Vybrant® DiI cell-labeling solution | 1 mL |
| V22886 | Vybrant® DiO cell-labeling solution | 1 mL |
| V22887 | Vybrant® DiD cell-labeling solution | 1 mL |
| V22888 | Vybrant® CM-DiI cell-labeling solution | 1 mL |
| V22889 | Vybrant® Multicolor Cell-Labeling Kit *DiO, DiI, DiD solutions, 1 mL each* | 1 kit |
※価格は、左上のカタログ検索にカタログ番号を入力してご確認ください。
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