細胞トレーシングツール
固定可能な極性分子を用いるニューロントレーシング
Invitrogenは、細胞トレーサーとして使用することができる広範囲で高い水溶性色素と他の検出可能なプローブを用意しています。ほとんどの場合、これら水溶性プローブの極性は高すぎて、細胞膜を通って受動的に拡散することができません。そのため、色素を細胞にロードするには特別な方法を用いなければなりません。これには、微量注入、飲作用、あるいは、細胞膜を一時的に透過性にする方法1などがあります。色素を細胞に導入するのにお使いいただける製品については、細胞ローディングを容易にする試薬の章をご参照ください。
ヒドラジド誘導体
蛍光を発するヒドラジドおよびビオシチン誘導体は、細胞トレーシングに使用されている最も一般的な極性分子です。アミン含有誘導体は、一般的なアルデヒドをベースとする固定液によって細胞と組織に固定することができます。それによって、色素は、その後の試料処理後も保持されます。
当社では、Alexa Fluor®色素にコンジュゲートさせたヒドラジドを提供しています。これは光安定性が高く、画像取得時に露光時間が長くても優れた明るさを示し、細かな構造を検出することができます。これら色素は高い水溶性を有しています(通常8%以上)。より使いやすい製品として、200 mM KClで溶解したAlexa Fluor®色素-ヒトラジドコンジュゲートを3種ご用意しております。これは、微量注入実験にすぐに使用できます。
ヒドラジン誘導体であるルシファーイエローはニューロンの形態研究に人気の高いツールです。これはジアミノベンジジン(DAB)を電子顕微鏡検査用の不溶性の電子密度反応産物へと光変換(photoconvert)させるのに使用することができます2、3。Invitrogenではルシファーイエローを、カリウム塩と、より溶けやすいリチウム塩に加えて、微量注入用に100 mM水溶液タイプの計3種類を提供しています。
ニューロントレーシング用ヒドラジド誘導体
| 色素 | Salt | Ex/Em* | MW | Cat.No. |
|---|
| * およその最大励起(Ex)および蛍光波長(Em)(nm)。† 微量注入用10 mM溶液タイプ(200 mM KCl中)。‡ 微量注入用100 mM水溶液タイプ。 |
| Alexa Fluor® 350 hydrazide | Sodium salt | 345/445 | 349 | A10439 |
| Alexa Fluor® 488 hydrazide | Sodium salt | 493/517 | 570 | A10436 A10440 † |
| Alexa Fluor® 555 hydrazide | Tris(triethylammonium) salt | 554/567 |
〜1150 |
A20501MP |
| Alexa Fluor® 568 hydrazide | Sodium salt | 576/599 | 730 | A10437 A10441 † |
| Alexa Fluor® 594 hydrazide | Sodium salt | 588/613 | 759 | A10438 A10442 † |
| Alexa Fluor® 633 hydrazide | Bis(ammonium) salt | 624/643 | 〜950 |
A30634 |
| Alexa Fluor® 647 hydrazide | Tris(triethylammonium) salt | 649/666 | 〜1200 |
A20502 |
| Lucifer yellow CH | Lithium salt | 428/536 | 457 | L453 L12926 ‡ |
| Lucifer yellow CH | Potassium salt | 428/536 | 522 | L1177 |
Alexa Fluor® 568ヒドラジド(上の細胞、赤色)、Alexa Fluor® 488ヒドラジド(中央の細胞、緑色)、あるいはAlexa Fluor® 488ヒドラジドとAlexa Fluor® 568ヒドラジド両方(下の細胞、共局在部位では黄色)を注入した3つのウサギ網膜神経節細胞。画像は、Michiel van Wyk氏(University of Queensland, Australia)からの提供。
CA1錐体細胞のスパインにおけるCa2+インフラックスの、810 nmでの2光子励起画像化。Alexa Fluor® 594ヒドラジドによって生じた解剖学的画像(赤色チャンネル)と、fluo-5Fによって生じたCa2+シグナル(緑色チャンネル)を重ね合わせた画像。観察されたCa2+インフラックスは、側副細胞軸索を電極刺激してからグルタミン酸塩で活性化したNMDA受容体を通過している。最初のフレーム後に短時間(0.2 ms)の脱分極刺激を適用した。フレーム速度は4フレーム/秒。画像は、Thomas Oertner氏とKarel Svoboda氏(Cold Spring Harbor Laboratory)からの提供。
ビオシチン誘導体
ビオシチン(e-ビオチノイル-L-リジン)と蛍光ビオシチン誘導体も一般的な微量注入可能な順行性ニューロントレーサーです。この水溶性トレーサーは、しばしば電気生理学的測定中に、ニューロンの機能と構造および連絡性を相互に関連付けるために、ニューロンを標識するのに使用されます4、5。ビオシチン誘導体は全て一級アミンを含むので、ホルムアルデヒドもしくはグルタルアルデヒドで細胞に固定することができ、その後、アビジンまたはストレプトアビジンプローブを用いて検出することができます(二次検出用ツール - 蛍光標識ストレプトアビジンの章をご参照)。当社の、明るい光安定性のビオシチンのAlexa Fluor®コンジュゲートも、固定試料あるいは非固定試料で直接観察することができます。
ニューロントレーシング用ビオシチン誘導体
| 色素 | Salt | Ex/Em* | MW (in daltons) | Cat.No. |
|---|
| * およその最大励起(Ex)および蛍光波長(Em)(nm)。NA＝該当せず。 |
| Alexa Fluor® 488 biocytin | Disodium salt | 494/520 | 975 | A12924 |
| Alexa Fluor® 546 biocytin | Sodium salt | 556/572 | 1210 | A12923 |
| Alexa Fluor® 594 biocytin | Sodium salt | 591/618 | 1141 | A12922 |
| Biocytin (e-biotinoyl-l-lysine) |
NA | NA | 372 | B1592 |
ヒルの神経節において緑色蛍光Alexa Fluor® 488ヒドラジドをイオン導入法により充填したライディッヒニューロンの神経突起および赤色蛍光Alexa Fluor® 568ヒドラジドを充填した巨大グリア細胞の細胞体。画像は、F. Britz氏、C. Lohr氏、 J. Schmidt氏およびJ.W. Deitmer氏(University of Kaiserslautern, Germany)からの提供。
ルシファーイエローCHまたはスルホローダミン101のいずれかを微量注入したAplysia californicaの左上四分円ニューロン培養物。オーバーラップしている突起が広範囲に配列しているのを示す(J. Neurophysiol 66, 316 (1991))。画像は、David Kleinfeld氏(AT & T Bell Laboratories)とBrian Salzberg氏(University of Pennsylvania School of Medicine)からの提供。
- 参考文献：
- 1. Methods Cell Biol 29, 153 (1989); 2. J Neurosci Methods 41, 45 (1992); 3. J Neurosci Methods 33, 207 (1990); 4. Nature 377, 734 (1995); 5. J Neurosci 14, 4338 (1994).
製品：
| Cat.No. | 製品名 | サイズ |
|---|
| A10436 | Alexa Fluor® 488 hydrazide, sodium salt | 1 mg |
| A10437 | Alexa Fluor® 568 hydrazide, sodium salt | 1 mg |
| A10438 | Alexa Fluor® 594 hydrazide, sodium salt | 1 mg |
| A10439 | Alexa Fluor® 350 hydrazide, sodium salt | 5 mg |
| A10440 | Alexa Fluor® 488 hydrazide, sodium salt *for microinjection* *10 mM in 200 mM KCl* | 125 μL |
| A10441 | Alexa Fluor® 568 hydrazide, sodium salt *for microinjection* *10 mM in 200 mM KCl* | 125 μL |
| A10442 | Alexa Fluor® 594 hydrazide, sodium salt *for microinjection* *10 mM in 200 mM KCl* | 125 μL |
| A12922 | Alexa Fluor® 594 biocytin, sodium salt (biocytin Alexa Fluor® 594) | 250 μg |
| A12923 | Alexa Fluor® 546 biocytin, sodium salt (biocytin Alexa Fluor® 546) | 250 μg |
| A12924 | Alexa Fluor® 488 biocytin, disodium salt (biocytin Alexa Fluor® 488) | 250 μg |
| A20501MP | Alexa Fluor® 555 hydrazide, tris (triethylammonium) salt | 1 mg |
| A20502 | Alexa Fluor® 647 hydrazide, tris(triethylammonium salt) | 1 mg |
| A30634 | Alexa Fluor® 633 hydrazide, bis(triethylammonium) salt | 1 mg |
| B1592 | biocytin (e-biotinoyl-L-lysine) |
100 mg |
| L1177 | lucifer yellow CH, potassium salt | 25 mg |
| L12926 | lucifer yellow CH, lithium salt *for microinjection* *100 mM in water* | 100 μL |
| L453 | lucifer yellow CH, lithium salt | 25 mg |
