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細胞トレーシングツール
逆行性および順行性ニューロントレーサー
ニューロントレーシングは、逆行性(軸索末端から標識を始め、色素は軸索から細胞体へと逆に輸送される)もしくは順行性(樹状突起と細胞体から標識を始め、色素は軸索とその末端へと輸送される)の両方の方法で行うことができます。場合によっては、両方向同時にトレーサーが作用することもありますが、一方向にしかトレーサーが作用しない場合もあります。ニューロンの逆行性および順行性トレーシングは、多様な蛍光プローブと非蛍光プローブを用いて行われています1。逆行性トレーサーと順行性トレーサーには、下記のようなタンパク質コンジュゲート(レクチンを含む)、デキストランコンジュゲート、蛍光マイクロスフェアの他に、DiIのような脂質親和性トレーサー、ビオチン誘導体、極性蛍光色素(本章のこれより前の節をご参照ください)が含まれます。
蛍光コレラ毒素コンジュゲート
コレラ毒素サブユニットBは、ニューロンの逆行性標識の重要なツールであり2、3、前脳求心神経トレーシング4と傍小脳脚領域の投影5に有用です。当社のコレラ毒素コンジュゲートは、毒素サブユニットAを全く含まない組換え型コレラ毒素サブユニットBから調製されているので、分子の毒性もしくはADPリボシル化活性については全く心配がありません。Invitrogenのコレラ毒素コンジュゲートは、高感度で選択的に受容体を標識し、ニューロントレーシングを行うことができる、優れた明るさを備えた汎用性トレーサーです。
ニューロンの逆行性標識用コレラ毒素コンジュゲート
| コレラ毒素サブユニットBコンジュゲート |
励起/蛍光 |
Cat.No. |
| Alexa Fluor 488 |
495/519 |
C34775 (100 μg); C22841 (500 μg) |
| Alexa Fluor 555 |
555/565 |
C34776 (100 μg); C22843 (500 μg) |
| Alexa Fluor 594 |
590/617 |
C34777 (100 μg); C22842 (500 μg) |
| Alexa Fluor 647 |
650/668 |
C34778 (100 μg) |
| ビオチン-XX |
N/A |
C34779 (100 μg) |
| ホースラディッシュペルオキシダーゼ |
N/A |
C34780 (100 μg) |
| * およその最大励起(Ex)と最大蛍光(Em)(nm)。N/A=該当しません。 |
蛍光レクチンコンジュゲート
Phaseolus vulgarisのフィトヘムアグルチニン-L (PHA-L)は順行性軸索トレーシングに広く使用されているレクチンです。イオン導入法によって注入されたPHA-Lは、注入部位では充填されたニューロンの形態学的特徴をはっきりと示し、軸索と軸索末端を染色します。さらに、細胞内に輸送されたPHA-Lは、長期間分解しません。PHA-Lは当社の2色実験用のビオチンデキストランアミンと組み合わせても使用されています6、7。逆行性トレーシングには、当社の蛍光小麦胚芽アグルチニン(WGA)コンジュゲートからお選びください2、8〜10。
インビトロジェンの褪色防止製品
| コンジュゲート* |
Ex/Em † |
Tracing Application |
Cat.No. |
| PHA-L Alexa Fluor 488 |
495/519 |
Anterograde |
L11270 |
| PHA-L Alexa Fluor 594 |
590/617 |
Anterograde |
L32456 |
| PHA-L Alexa Fluor 647 |
650/668 |
Anterograde |
L32457 |
| WGA Alexa Fluor 350 |
346/442 |
Retrograde |
W11263 |
| WGA Alexa Fluor 488 |
495/519 |
Retrograde |
W11261 |
| WGA Alexa Fluor 594 |
590/617 |
Retrograde |
W11262 |
| WGA Alexa Fluor 633 |
632/647 |
Retrograde |
W21404 |
| * PHA-L = Phytohemagglutanin-L from Phaseolus vulgaris. WGA = Wheat germ agglutinin. † およその最大励起(Ex)および蛍光波長(Em)(nm)。 |
NeuroTrace蛍光ニッスル染色剤
Franz Nisslが100年以上も前に記述しているニッスル物質は、ニューロン固有のものです11。驚くほどの量の粗面小胞体で構成されているニッスル物質は、ニューロンの異常に高いタンパク質合成能力を反映しています。様々な蛍光性あるいは発色性「ニッスル染色剤」がこの対比染色に使用されています。これには、アクリジンオレンジ、エチジウムブロマイド、クレシルバイオレット、メチレンブルー、サフラニン-O、トルイジンブルーOがあります。当社は、ニューロン染色用に広範囲なスペクトルの蛍光色を提供するばかりでなく、従来の色素よりもはるかに感受性の高い5種類の蛍光ニッスル染色剤を開発しました。
NeuroTrace 530/615赤色蛍光ニッスル染色剤で標識した神経体細胞を示すマウス小脳切片合成画像。核はDAPIで対比染色した。
インビトロジェンの褪色防止製品
| Cat.No. |
Fluorescent Color |
Ex * |
Em * |
各フィルターセットのシグナル強度† |
405 ± 20
445
> = 450 |
485 ± 11
505
535 ± 17.5 |
510 ± 11.5
540
> = 550 |
560 ± 20
590
610 ± 10 |
640 ± 10
660
682 ± 11 |
| N21479 |
Blue |
435 |
455 |
+++ |
+ |
? |
? |
? |
| N21480 |
Green |
500 |
525 |
? |
+++ |
+++ |
? |
? |
| N21481 |
Yellow |
515 |
535 |
? |
+++ |
+++ |
+++ |
? |
| N21482 |
Red |
530 |
615 |
? |
? |
++ |
+++ |
? |
| N21483 |
Deep red |
640 |
660 |
? |
? |
? ‡ |
? |
++ |
| * およその最大励起(Ex)および蛍光波長(Em)(nm)。† 各フィルターセットの上から順に励起フィルター、ダイクロイックミラーおよび蛍光フィルターのスペクトル特性(nm)を示す。それぞれのシグナル強度は＋および-で示す。‡ バックグラウンドの高い蛍光。 |
蛍光標識またはビオチン化デキストラン
デキストランは、中から高分子量で、水溶性に優れ、毒性の低い親水性多糖類です。蛍光標識またはビオチン化デキストランは、ニューロン投射をトレースするために日常的に使用されており、試験方法と使用する組織の種類によって、順行性あるいは逆行性トレーサーとして有効に機能することができます。分子量3,000〜10,000の範囲の当社の固定可能なデキストランは、より効率よく輸送し、標識後、アルデヒドで固定することができるので、ニューロントレーシングに一般的に好まれています(表参照)。その他のデキストランコンジュゲートについては、「トレーシング用途の蛍光標識またはビオチン化デキストラン」の節をご参照ください。
Invitrogenはまた、NeuroTrace® BDA-10,000ニューロントレーサーキットも提供しています。これには、ビオチンデキストランアミン(BDA-10,000)、HRPアビジン、DABが含まれています。BDA-10,000をニューロン組織に注入します。その後、この組織を固定し、切片化し、アビジンHRPと共にインキュベートします。次に、この試料をDABで処理すると、電子密度の高いDAB反応産物を電子顕微鏡あるいは光学顕微鏡で見ることができます。
ビオチン化したデキストラン(3000 MW)であるニューロントレーサーを使用して、マウス嗅球の僧帽弁ニューロンを明らかにした。この明視野画像では、ニューロンは茶色に染色される(アビジン-ビオチン-ペルオキシダーゼ/ジアミノベンジジン反応)。チオニンを対比染色剤として使用し、細胞の形態を明らかにした(青色)。画像は、Laura Lopez-Mascaraque氏(Cajal Institute, Madrid, Spain)からの提供。
ProLong Gold褪色防止試薬使用後の蛍光強度
| ラベル |
Ex/Em * |
分子量(ダルトン) |
| 3,000 |
10,000 |
| Alexa Fluor 488 |
494/521 |
|
D22910 ‡ |
| Fluorescein |
494/518 |
|
D1820 † (fluoro-emerald) |
| Fluorescein and Biotin |
494/518 |
D7156 † (micro-emerald) |
D7178 † (mini-emerald) |
| Tetramethylrhodamine and Biotin |
555/580 |
D7162 † (micro-ruby) |
D3312 † (mini-ruby) |
| Tetramethylrhodamine |
555/580 |
|
D1817 † (fluoro-ruby) |
| Alexa Fluor 546 |
556/573 |
|
D22911 ‡ |
| Alexa Fluor 568 |
578/603 |
|
D22912 ‡ |
| Alexa Fluor 594 |
590/617 |
|
D22913 ‡ |
| Texas Red |
595/615 |
D3328 |
D1863 † |
| Alexa Fluor 647 |
650/668 |
|
D22914 ‡ |
| Biotin |
NA |
D7135 † (BDA-3000) |
D1956 † (BDA-10,000) |
| * およその最大励起(Ex)および蛍光波長(Em)(nm)。† リジンを含む"リジン固定可能"なデキストラン。‡ 遊離アミン(リジンではない)を含む"固定可能な"なデキストラン。両者はホルムアルデヒドもしくはグルタルアルデヒドでも固定可能。 |
蛍光マイクロスフェア
大部分が保存剤として2 mMアジ化ナトリウムを含み、2%固形状の水溶性懸濁液として提供されている当社の他の蛍光マイクロスフェアとは異なり、直径0.04 μmのFluoSpheres®ビースは、保存剤を含まない5%固形状の水性懸濁液として調製されています。当社の標準的なFluoSpheres®マイクロスフェア濃度の2倍以上の濃度では、これらカルボン酸修飾0.04 μmビーズは、微量注入可能なトレーサーを必要とする用途に非常に適しています。黄緑色、橙色、赤色、暗赤色の蛍光色が単品製品として、あるいはFluoSpheres蛍光カラーキットでもご利用いただけます。この0.04 μmビーズに関する詳細は、「トレーシング用蛍光標識またはビオチン化マイクロスフェア」の章をご参照ください。
- 参考文献：
- 1. Brain Res Bull 51, 11 (2000); 2. Brain Res 243, 215 (1982); 3. Brain Res 231, 33 (1982); 4. Neuroscience 82, 443 (1998); 5. Brain Res 816, 364 (1999); 6. J Neurosci Methods 48, 75 (1993); 7. Histochem Cell Biol 110, 509 (1998); 8. Neuroscience 43, 611 (1991); 9. Neuroscience 87, 275 (1998); 10. J Neurosci Methods 93, 139 (1999); 11. Neuroscience Protocols, Wouterlood FG, Ed. 93-050-12, pp. 01-07 (1993).
製品：
| Cat.No. |
製品名 |
サイズ |
| C22841 |
cholera toxin subunit B (recombinant), Alexa Fluor 488 conjugate |
500 μg |
| C22842 |
cholera toxin subunit B (recombinant), Alexa Fluor 594 conjugate |
500 μg |
| C22843 |
cholera toxin subunit B (recombinant), Alexa Fluor 555 conjugate |
500 μg |
| C34775 |
cholera toxin subunit B (recombinant), Alexa Fluor 488 conjugate |
100 μg |
| C34776 |
cholera toxin subunit B (recombinant), Alexa Fluor 555 conjugate |
100 μg |
| C34777 |
cholera toxin subunit B (recombinant), Alexa Fluor 594 conjugate |
100 μg |
| C34778 |
cholera toxin subunit B (recombinant), Alexa Fluor 647 conjugate |
100 μg |
| C34779 |
cholera toxin subunit B (recombinant), biotin-XX conjugate |
100 μg |
| C34780 |
cholera toxin subunit B (recombinant), horseradish peroxidase conjugate |
100 μg |
| D1817 |
dextran, tetramethylrhodamine, 10,000 MW, lysine fixable (fluoro-ruby) |
25 mg |
| D1820 |
dextran, fluorescein, 10,000 MW, anionic, lysine fixable (fluoro-emerald) |
25 mg |
| D1863 |
dextran, Texas RedR, 10,000 MW, lysine fixable |
25 mg |
| D1951 |
dextran, fluorescein and tetramethylrhodamine, 70,000 MW, anionic |
10 mg |
| D1956 |
dextran, biotin, 10,000 MW, lysine fixable (BDA-10,000) |
25 mg |
| D22910 |
dextran, Alexa Fluor 488; 10,000 MW, anionic, fixable |
5 mg |
| D22911 |
dextran, Alexa Fluor 546; 10,000 MW, anionic, fixable |
5 mg |
| D22912 |
dextran, Alexa Fluor 568; 10,000 MW, anionic, fixable |
5 mg |
| D22913 |
dextran, Alexa Fluor 594; 10,000 MW, anionic, fixable |
5 mg |
| D22914 |
dextran, Alexa Fluor 647; 10,000 MW, anionic, fixable |
2 mg |
| D3312 |
dextran, tetramethylrhodamine and biotin, 10,000 MW, lysine fixable (mini-ruby) |
10 mg |
| D3328 |
dextran, Texas Red, 3000 MW, lysine fixable |
10 mg |
| D7135 |
dextran, biotin, 3000 MW, lysine fixable (BDA-3000) |
10 mg |
| D7156 |
dextran, fluorescein and biotin, 3000 MW, anionic, lysine fixable (micro-emerald) |
5 mg |
| D7162 |
dextran, tetramethylrhodamine and biotin, 3000 MW, lysine fixable (micro-ruby) |
5 mg |
| D7178 |
dextran, fluorescein and biotin, 10,000 MW, anionic, lysine fixable (mini-emerald) |
10 mg |
| L11270 |
lectin PHA-L from Phaseolus vulgaris (red kidney bean), Alexa Fluor 488 conjugate |
1 mg |
| L32456 |
lectin PHA-L from Phaseolus vulgaris (red kidney bean), Alexa Fluor 594 conjugate |
1 mg |
| L32457 |
lectin PHA-L from Phaseolus vulgaris (red kidney bean), Alexa Fluor 647 conjugate |
1 mg |
| N21479 |
NeuroTrace 435/455 blue fluorescent Nissl stain *solution in DMSO* |
1 mL |
| N21480 |
NeuroTrace 500/525 green fluorescent Nissl stain *solution in DMSO* |
1 mL |
| N21481 |
NeuroTrace 515/535 yellow fluorescent Nissl stain *solution in DMSO* |
1 mL |
| N21482 |
NeuroTrace 530/615 red fluorescent Nissl stain *solution in DMSO* |
1 mL |
| N21483 |
NeuroTrace 640/660 deep-red fluorescent Nissl stain *solution in DMSO* |
1 mL |
| N7167 |
NeuroTrace BDA-10,000 Neuronal Tracer Kit |
1 kit |
| W11261 |
wheat germ agglutinin, Alexa Fluor 488 conjugate |
5 mg |
| W11262 |
wheat germ agglutinin, Alexa Fluor 594 conjugate |
5 mg |
| W11263 |
wheat germ agglutinin, Alexa Fluor 350 conjugate |
5 mg |
| W21404 |
wheat germ agglutinin, Alexa Fluor 633 conjugate |
5 mg |
※価格は、左上のカタログ検索にカタログ番号を入力してご確認ください。
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