画像撮影用ツールとアクセサリー

共焦点顕微鏡調整用マイクロスフェア

Invitrogenでは共焦点レーザースキャニング顕微鏡の調整、感度および安定性を検査するためのいくつかのFocalCheckTM蛍光マイクロスフェアを提供しています1。さまざまな蛍光色とサイズ(直径)のビーズが提供されており、下記のような長所があります:
　 ●装置の調節不良、その他の異常を視覚的に検出します。
　 ●3次元画像用途における光学的な切片の厚さ(Z-解像度)を確認する上で有用です。
　 ●最大励起／蛍光が共焦点レーザースキャニング顕微鏡で広く用いられているレーザー光源と光学フィルターによく対応しています。

FocalCheckTMリング染色蛍光マイクロスフェア

FocalCheckTMリング染色蛍光マイクロスフェアは、色素が各マイクロスフェアの最外層にのみ蓄積する当社独自の染色方法を用いて作製されています。ビーズの残り部分は染色されないままか、もしくは異なる色の色素で染色されるので、2色または3色の蛍光色を持つリング染色を示すマイクロスフェア、異なる蛍光コアカラーと結合した色のリング染色を含むマイクロスフェアなど、さまざまな多色染色が可能です(表参照)。リング染色FocalCheckTMビーズ(または結合したFocalCheckTMビーズのリングおよびコアの画像)の複数のリング画像がすべての次元で完全に一致した時に正しく画像調整されたことになります。

FocalCheckTM蛍光マイクロスフェア

リング染色*	コア染色	ビーズサイズ(μm)	Cat.No.
Blue, Orange	None	15	F7234
Green, Dark Red	None	15	F7240
Green, Orange, Dark Red	None	15	F7235
Green, Orange, Dark Red	None	6	F14806
Green	Blue	15	F7237
Green	Blue	6	F14808
Green	Dark Red	15	F7238
Orange	Blue	15	F7236
Dark Red	Green	15	F7239
Dark Red	Green	6	F14807
* リングおよびコアに用いている蛍光のおよその最大励起/蛍光波長(nm)は、青色が 365/430、緑色が 505/515、橙色が 560/580、暗赤色が 660/680。

共焦点レーザースキャニング顕微鏡の光学的断面とFocalCheckTM マイクロスフェアを用いた調整。A)リング染色マイクロスフェアのz軸に沿った上から下への順次光学切断面。B)蛍光リング(またはコア)の直径は光学焦点面の深さに依存している。C)共焦点レーザースキャニング顕微鏡ではUVと可視光線の波長で光の道筋が異なる。また、放出された蛍光は異なる光電子増倍管で検出する。ここで示した光学調整方法は当社のFocalCheckTMマイクロスフェアで行える。たとえば、ビーズ全体が青色の蛍光を放出し橙色蛍光のリング染色を有するマイクロスフェアを用いると、青色のコアと橙色のリングをそろえることによりUV／可視光線波長を三次元調整できる。また、緑色／橙色／暗赤色の蛍光リング染色を含むFocalCheckTMマイクロスフェアのリングをそろえることにより3色の焦点を同時に調整することもできる。

FocalCheckTMマイクロスフェアに含まれる色素の正規化励起スペクトル。広く用いられている励起用レーザー光源の波長を色素の励起スペクトルに重ね合わせることで、これらのビーズがキャリブレーションリファレンスとして利用できることを示す。Ar=アルゴン-イオンレーザー、Kr-Ar=クリプトン-アルゴンレーザー。He-Ne=ヘリウム-ネオンレーザー。

緑色/橙色/暗赤色の蛍光リング染色を有する直径15 μmのFocalCheckTMビーズを共焦点顕微鏡を用いて撮影した。3色チャンネルを重ね合わせることにより、グリーン(画像では緑色)、オレンジ(画像では赤色)および暗赤色(画像では青色)間のズレが現れる。この例におけるズレは、各カラーチャンネルについて光学経路の異なる一次二色ミラーを使用していることが原因。光学フィルターセットを切り換えることによる同様のズレは広視野顕微鏡でも生じる。FocalCheckTMまたはTetraSpeckTMビーズを用いることで個々のカラーチャンネルのオフセット値を求めることができ、ソフトウェアを用いて画像を再調整できる。

FocalCheckTM Thin-Ring蛍光マイクロスフェア

FocalCheckTM Thin-Ring蛍光マイクロスフェアキットには共焦点レーザースキャニング顕微鏡で断面を見ると明るくシャープな蛍光リングパターンを示す直径1.0 μmのビーズが含まれており、装置の調整不良その他の光学的異常が非常によく分かります。二重にリング染色されたビーズのリング画像(または組み合わせビーズのリングとコアの画像)が完全に一致していると画像にズレが生じません。FocalCheckTM Thin-Ringマイクロスフェア色素の最大蛍光励起/蛍光は、広く用いられている共焦点顕微鏡のKr-ArおよびUVアルゴン-イオンレーザーの主な放出直線に対応しています。キットには3種類のマイクロスフェア懸濁液が含まれており、それぞれが異なるカラー特性をもっています。1本目の懸濁液には2つのリング染色を施したビーズ(緑色(495/515 nm)および赤色(575/600 nm))が含まれています。2本目の懸濁液には緑色のリング染色と暗赤色(660/680 nm)のコア染色を施したビーズが含まれています。3本目の懸濁液には赤色のリング染色と青色のコア染色(365/430 nm)を施したビースが含まれています。

顕微鏡スライドにあらかじめ封入されたFocalCheckTMマイクロスフェア

当社のFocalCheckTM蛍光マイクロスフェアキットは6 μmまたは15 μmのマイクロスフェアのサンプルがスライド上にあらかじめ封入されています。各キットには3枚のスライドが含まれており、それぞれ下記のようなカラー特性があります: 　
　●緑色蛍光、橙色蛍光および暗赤色蛍光リング染色 　
　●緑色蛍光リング染色と青色蛍光コア染色
　●暗赤色蛍光リング染色と緑色蛍光コア染色

スペクトル非混合(unmixing)用FocalCheckTM蛍光マイクロスフェア

FocalCheckTM蛍光マイクロスフェアキットは、ZeissR METAシステムおよびその他のスペクトル画像システムでスペクトル非混合(unmixing)用に開発されました。これらのマイクロスフェアは2種類の蛍光色素で染色されており、目視では同じ色に見えます。しかし、直線-非混合(unmixing)データ処理アルゴリズムを適用すると色素がスペクトル分解され、一方は外部リングのみが見え、他方はビーズのコアのみが見えます。これらの 6 μmの2重染色マイクロスフェアはFocalCheckTM DoubleGreen、DoubleOrange、DoubleRedおよびDoubleFarRed蛍光マイクロスフェアキットのスライドに封入されて提供されています。キットには2つの色素でコアを染色した封入済みのコントロールマイクロスフェアも含まれています。
これらは下記のような4種類のカラー特性を持つ製品として販売されています: 　
　●緑色蛍光(500/512 nm)リング色素と若干長波長の緑色蛍光(512/525 nm)コア色素
　●橙色蛍光(532/552 nm)リング色素と若干長波長の橙色蛍光(545/565 nm)コア色素
　●赤色蛍光(580/610 nm)リング色素と若干短波長の赤色蛍光(569/574 nm)コア色素
　●近赤外蛍光(665/695 nm)リング色素と若干短波長の近赤外蛍光(640/674 nm)コア色素

FocalCheckTM DoubleGreen蛍光マイクロスフェアキットの2重標識マイクロスフェアビーズの混成z-シリーズ画像。2つの緑色蛍光色素がスペクトル非混合(unmixing)により分離されており、一方が赤色(擬似カラー)を示す。ソフトウェアのレンダリング(画像の三次元化)によりスライス間の失われた情報が補間により埋められて立体のオブジェクトを創り出している。

参考文献：

1. Appl Immunohistochem Mol Morphol 7, 156 (1999).

製品：

Cat.No.	製品名	サイズ
F14791	FocalCheck Thin-Ring Fluorescent Microspheres Kit, 1.0 μm *three suspensions*	1 kit
F14806	FocalCheck microspheres, 6 μm, fluorescent green/orange/dark-red ring stains	0.5 mL
F14807	FocalCheck microspheres, 6 μm, fluorescent dark-red ring stain/green throughout	0.5 mL
F14808	FocalCheck microspheres, 6 μm, fluorescent green ring stain/blue throughout	0.5 mL
F24633	FocalCheck Fluorescent Microspheres Kit, 6 μm *mounted on slides*	1 kit
F24634	FocalCheck Fluorescent Microspheres Kit, 15 μm *mounted on slides*	1 kit
F36905	FocalCheck DoubleGreen Fluorescent Microspheres Kit, 6 μm *mounted on slides*	1 kit
F36906	FocalCheck DoubleOrange Fluorescent Microspheres Kit, 6 μm *mounted on slides*	1 kit
F36907	FocalCheckDoubleRed Fluorescent Microspheres Kit, 6 μm *mounted on slides*	1 kit
F36908	FocalCheck DoubleFarRed Fluorescent Microspheres Kit, 6 μm *mounted on slides*	1 kit
F7234	FocalCheck microspheres, 15 μm, fluorescent blue/orange ring stains	0.5 mL
F7235	FocalCheckTM microspheres, 15 μm, fluorescent green/orange/dark-red ring stains	0.5 mL
F7236	FocalCheck microspheres, 15 μm, fluorescent orange ring stain/blue throughout	0.5 mL
F7237	FocalCheck microspheres, 15 μm, fluorescent green ring stain/blue throughout	0.5 mL
F7238	FocalCheck microspheres, 15 μm, fluorescent green ring stain/dark red throughout	0.5 mL
F7239	FocalCheck microspheres, 15 μm, fluorescent dark-red ring stain/green throughout	0.5 mL
F7240	FocalCheck microspheres, 15 μm, fluorescent green/dark-red ring stains	0.5 mL
F36909	FocalCheck fluorescence microscope test slide #1	1 枚
F36913	FocalCheck fluorescence microscope test slide #2	1 枚
F36914	FocalCheck fluorescence microscope test slide #3	1 枚

#1:共焦点顕微鏡や広視野顕微鏡の日常的な校正に用いる。
#2:重なり合う蛍光を分離できるかどうかのチェックに用いる。
#3:フィルターの性能チェック、イメージングのテストに用いる。

※価格は、左上のカタログ検索にカタログ番号を入力してご確認ください。