シグナル増幅用ツール

蛍光色素、ハプテンおよびGFPに対する抗体

新・抗GFP抗体 ４品目増えました(2007年12月）

ビオチン-アビジンを検出する別の方法

蛍光色素と非蛍光色素には、直接的な光学的検出に有用であるばかりでなく、in situハイブリダイゼーション、酵素免疫吸着測定法(ELISA)やブロット上の標識ターゲットの検出などに使用する時、二次検出試薬によって認識することができる優れたハプテンを作り出すものがあります。対応する抗色素抗体が利用できるなら、その色素をハプテンとして用いることで、ビオチンとアビジン試薬を用いた各種の手法(二次検出用ツールの章の蛍光標識ストレプトアビジンの節を参照ください)と同様の操作を行うことは本質的には可能です。さらに、色素やその他のハプテンに対する抗体には、次のようなユニークな用途と特長があります:

• シグナル増幅
• 内因性ビオチンに関連するバックグラウンド染色の排除
• 相関する蛍光および電子顕微鏡観察

ほとんどの抗色素抗体は、ターゲット色素の蛍光を強力に消光します。しかし、立体障害のために、タンパク質に共有結合した色素の蛍光消光の最大でも有意に少ないと思われます。

抗蛍光色素および抗ハプテン抗体とコンジュゲート

抗蛍光色素／ハプテン	免疫動物	ラベル	Cat.No.
* この抗体はRhodamine Red色素も認識します。
Fluorescein/Oregon Green® dye	Rabbit	なし	A889
		Biotin-XX	A982
		Alexa Fluor® 488	A11090
		Alexa Fluor® 594	A11091
		R-phycoerythrin	A21250
	Goat	なし	A11095
		Alexa Fluor® 488	A11096
	Mouse (clone 4-4-20)	なし	A6421
Alexa Fluor® 405/Cascade Blue	Rabbit	なし	A5760
Alexa Fluor® 488	Rabbit	なし	A11094
Biotin	Mouse (clone 2F5)	なし	A11242
		Alexa Fluor® 594	A31800
BODIPY® FL	Rabbit	なし	A5770
Dansyl	Rabbit	なし	A6398
Dinitrophenyl	Rabbit	なし	A6430
		Biotin-XX	A6435
		Alexa Fluor® 488	A11097
Lucifer Yellow	Rabbit	なし	A5750
		Biotin-XX	A5751
Nitrotyrosine	Rabbit	なし	A21285
Tetramethylrhodamine *	Rabbit	なし	A6397
Texas Red®	Rabbit	なし	A6399

フルオレセイン標識抗体からの弱いシグナルの増幅

フルオレセイン コンジュゲートプローブ用Alexa Fluor 488シグナル増幅キットは、実質的にあらゆるフルオレセインもしくはオレゴングリーン色素含有プローブの蛍光と光安定性を同時に増強させるようにデザインされています。このキットは、実質的にフルオレセイン コンジュゲートよりも光安定性が高いAlexa Fluor 488コンジュゲートの優れた特性を利用できます。

固定して浸透処理したウシ肺動脈内皮細胞をF-アクチン染色剤の、フルオレセインファロイジン(右)で標識した。Alexa Fluor 594抗フルオレセイン/オレゴングリーンウサギIgG抗体により蛍光は緑色から赤色に変化した(左)。

フルオレセインおよびオレゴングリーン色素コンジュゲートプローブ用Alexa Fluor488シグナル増幅キットを用いて得られたフローサイトメトリー結果の例。ヒトT細胞白血病細胞(Jurkat)をフルオレセイン(FITC)マウス抗CD4抗体と、それに続いてAlexa Fluor 488ウサギ抗フルオレセイン/オレゴングリーン抗体と、さらにAlexa Fluor 488ヤギ抗ウサギIgG抗体で染色した。FITC抗CD4抗体を省略した陰性対照の蛍光値(黒)を、実験試料の平均シグナルの蛍光値(緑)と共に示す。

GFP由来シグナルの増幅

クラゲAequorea victoria由来の緑色蛍光タンパク質(GFP)は生理学的プロセスをモニターし、タンパク質の局在を視覚化し、トランスジェニック発現を検出するための汎用マーカーです。しかし多くの場合、GFPシグナルだけでは、良好なデータを得るのに十分ではなく、シグナル増幅が必要です。あるいはタンパク質が変性してしまい、もはや蛍光を発しない場合があります。このような障害を取り除くため、当社では、シグナル増幅法またはウエスタンブロットにおける変性タンパク質の検出に適したGFPに対する幾つかの抗体を提供しています。

抗GFP抗体

免疫動物	適用*	タイプ	ラベル	Cat.No.
* 免疫沈降(IP)、免疫組織化学(IHC)、免疫細胞化学(ICC)、ウエスタンブロッティング(WB)
Rabbit	IP, IHC, ICC, WB	Serum	なし	A6455
Rabbit	IP, IHC, ICC, WB	IgG fraction	なし	A11122
			Alexa FluorR 488	A21311
			Alexa FluorR 555	A31851
			Alexa FluorR 594	A21312
			Alexa FluorR 647	A31852
Rabbit	ICC, WB	IgG fraction	biotin-XX	A10259
			horseradish	A10260
Mouse	WB	mAb (clone 11E5)	なし	A11121‡
Chicken	ICC, WB	IgY fraction	なし	A10262
			biotin-XX	A10263

緑色蛍光タンパク質(GFP)発現ベクターをトランジェントに遺伝子導入したNIH 3T3細胞。細胞を固定し、当社のAlexa Fluor 594標識抗GFP抗体コンジュゲートで標識した。細胞の約10%がGFPを発現しており、GFP(緑色蛍光)と抗GFP抗体(赤色蛍光)両方の二重標識が示された。このオーバーレイでは、GFPを導入した細胞は、緑色と赤色のシグナルを示し、それがオーバーラップして黄色を示している。DAPIは核を明るい青色蛍光に染色する。非導入細胞では、DAPIは存在する唯一の色素であり、明るい青色蛍光を発している。

製品：

Cat.No.	製品名	サイズ
A11053	Alexa Fluor® 488 Signal-Amplification Kit for Fluorescein- and Oregon Green® Dye-Conjugated Probes *60-120 assays*	1 kit
A11090	anti-fluorescein/Oregon Green®, rabbit IgG fraction, Alexa Fluor® 488 conjugate *1 mg/mL*	0.5 mL
A11091	anti-fluorescein/Oregon Green®, rabbit IgG fraction, Alexa Fluor® 594 conjugate *1 mg/mL*	0.5 mL
A11094	anti-Alexa Fluor® 488, rabbit IgG fraction *1 mg/mL*	0.5 mL
A11095	anti-fluorescein/Oregon Green®, goat IgG fraction *1 mg/mL*	0.5 mL
A11096	anti-fluorescein/Oregon Green®, goat IgG fraction, Alexa Fluor® 488 conjugate *1 mg/mL*	0.5 mL
A11097	anti-dinitrophenyl-KLH, rabbit IgG fraction, Alexa Fluor® 488 conjugate *2 mg/mL*	0.5 mL
A11121	anti-green fluorescent protein, mouse IgG1, monoclonal 11E5 (anti-GFP, mAb 11E5)	100 μg
A11122	anti-green fluorescent protein, rabbit IgG fraction (anti-GFP, IgG) *2 mg/mL*	100 μL
A11242	anti-biotin, mouse IgG1, monoclonal 2F5	100 μg
A21250	anti-fluorescein/Oregon Green®, rabbit IgG fraction, R-phycoerythrin conjugate *2 mg/mL*	250 μL
A21285	anti-nitrotyrosine, rabbit IgG fraction *1 mg/mL*	0.5 mL
A21311	anti-green fluorescent protein, rabbit IgG fraction, Alexa Fluor® 488 conjugate (anti-GFP, IgG, Alexa Fluor® 488 conjugate) *2 mg/mL*	100 μL
A21312	anti-green fluorescent protein, rabbit IgG fraction, Alexa Fluor® 594 conjugate (anti-GFP, IgG, Alexa Fluor® 594 conjugate) *2 mg/mL*	100 μL
A31800	anti-biotin, mouse IgG1, monoclonal 2F5, Alexa Fluor® 594 conjugate *1 mg/mL*	100 μL
A31851	anti-green fluorescent protein, rabbit IgG fraction, Alexa Fluor® 555 conjugate (anti-GFP, IgG, Alexa Fluor® 555 conjugate) *2 mg/mL*	100 μL
A31852	anti-green fluorescent protein, rabbit IgG fraction, Alexa Fluor® 647 conjugate (anti-GFP, IgG, Alexa Fluor® 647 conjugate) *2 mg/mL*	100 μL
A5750	anti-lucifer yellow, rabbit IgG fraction *3 mg/mL*	0.5 mL
A5751	anti-lucifer yellow, rabbit IgG fraction, biotin-XX conjugate *3 mg/mL*	0.5 mL
A5760	anti-Alexa Fluor® 405/Cascade Blue, rabbit IgG fraction *3 mg/mL*	0.5 mL
A5770	anti-BODIPY® FL, rabbit IgG fraction *3 mg/mL*	0.5 mL
A6397	anti-tetramethylrhodamine, rabbit IgG fraction *1 mg/mL*	0.5 mL
A6398	anti-dansyl, rabbit IgG fraction *1 mg/mL*	0.5 mL
A6399	anti-Texas Red, rabbit IgG fraction *1 mg/mL*	0.5 mL
A6413	anti-fluorescein/Oregon Green®, rabbit IgG Fab fragment *0.5 mg/mL*	0.5 mL
A6421	anti-fluorescein/Oregon Green®, mouse IgG2a, monoclonal 4-4-20	0.5 mg
A6430	anti-dinitrophenyl-KLH, rabbit IgG fraction *2 mg/mL*	0.5 mL
A6435	anti-dinitrophenyl-KLH, rabbit IgG fraction, biotin-XX conjugate *2 mg/mL*	0.5 mL
A6455	anti-green fluorescent protein, rabbit serum (anti-GFP, serum)	100 μL
A889	anti-fluorescein/Oregon Green®, rabbit IgG fraction *1 mg/mL*	0.5 mL
A982	anti-fluorescein/Oregon Green®, rabbit IgG fraction, biotin-XX conjugate *1 mg/mL*	0.5 mL
A10259	Anti-GFP, rabbit IgG fraction, biotin-XX conjugate	100 µl
A10260	Anti-GFP, rabbit IgG fraction, horseradish conjugate	100 µl
A10262	Anti-green fluorescent protein, chicken IgY fraction	100 µl
A10263	Anti-GFP, chicken IgY fraction, biotin-XX conjugate	100 µl