シグナル増幅用ツール

Tyramideシグナル増幅（TSA）

Tyramideシグナル増幅(TSA)は、ターゲットタンパク質もしくは核酸配列をin situで高密度に標識するためにホースラディッシュペルオキシダーゼ(HRP)の触媒活性を利用する酵素媒介検出法です。TSAを用いると、標準的な二次抗体を用いて得られるシグナルよりも明るいシグナルが得られます。

発現量の少ないターゲットを染色する時や、短いオリゴヌクレオチドプローブを用いたFISHを行う時にTSAは効果的です。TSAは3ステップからなります。まず、ターゲットプローブ(一次抗体もしくはビオチン化オリゴヌクレオチド)に、HRP標識二次抗体またはストレプトアビジンコンジュゲートを結合させます。次に、蛍光標識またはビオチン化した多くのtyramide誘導体を、HRPで活性化し、tyramideラジカルを発生させます。最後に、tyramideラジカルは、HRP周辺の求核残基(例えば、抗原タンパク質のチロシンの側鎖)に共有結合します。tyramideラジカルは非常に反応性が高く寿命が短いので、拡散は最小限になります(ターゲットの近傍ということになります)。この方法では下記のことが可能になります。

• 非常に少量のターゲットを検出できます。
• 蛍光用と発色用の製品があります。
• 置換の少ない短いオリゴをFISHに使用できます。

多くの免疫組織化学的用途では、TSAによって感受性が増大するため、一次抗体の希釈率を上げ、非特異的バックグラウンドシグナルを低減することができます。

あらゆる用途のTSAキット

TSAキットには、ビオチンtyramideもしくは蛍光色素tyramideのセレクションがあり、これには当社の非常に明るく光安定性があるAlexa FluorR色素が含まれています(Alexa Fluor色素の詳細についてはレファレンスDを参照ください)。キットは、ビオチン化プローブの検出ばかりでなく、マウスもしくはウサギの一次抗体の増幅にもご利用いただけます。

多数のマウスIgG一次抗体のためのTSA増幅

1種類以上のマウスIgG1一次抗体が存在する時、容易にシグナル増幅を行うことができるように、TSAとZenon抗体標識テクノロジーを組み合わせたキットがあります。Alexa Fluor 488色素またはAlexa Fluor 568色素を含むキットからお選びください。

抗原の免疫標識に適用されたTSA検出方法の模式図

心臓灌流(transcardially perfused)したマウス脳の30 μm切片における免疫蛍光染色のtyramideシグナル増幅。内因性ペルオキシダーゼ活性を不活化するように切片を処理し、ブロックし、カルビンジンD-28K(Chemicon)に対するウサギ ポリクローナル抗体で染色した。洗浄後、切片をAlexa Fluor 488標識ヤギ抗ウサギIgG抗体(上図)またはHRP標識ヤギ抗ウサギIgG抗体と共にインキュベートし、続いてAlexa Fluor 488標識tyramide(TSAキット#12、下図)と共にインキュベートした。切片を洗浄し、スライドを封入し、ProLongアンチフェード試薬でカバースリップをマウントした。

マウスモノクローナル抗体FRet 43で標識し、ヤギ抗マウスIgG抗体と緑色蛍光を示すAlexa Fluor 488標識tyramideとの HRPコンジュゲートTSAキット#9を用いて検出したゼブラフィッシュ網膜凍結切片。核は青色蛍光を示すHoechst 33258で対比染色した。

TSA検出キット

ラベル	Horseradish Peroxidase Conjugate
	Ex/Em*	Goat Anti-Mouse IgG	Goat Anti-Rabbit IgG	Streptavidin
* およその最大励起(Ex)および蛍光波長(Em)(nm)　NA = 該当せず
Alexa Fluor® 350	347/442	T20917	T20927	T20937
Alexa Fluor® 405	400/424	T30950	T30951	T30952
Alexa Fluor® 488	495/519	T20912	T20922	T20932
Alexa Fluor® 555	555/565	T30953	T30954	T30955
Alexa Fluor® 568	579/604	T20914	T20924	T20934
Alexa Fluor® 594	591/617	T20915	T20925	T20935
Alexa Fluor® 647	650/668	T20916	T20926	T20936
Biotin-XX	NA	T20911	T20921	T20931

固定したゼブラフィッシュ網膜の横断面をマウスモノクローナルFRet 34でプローブし、続いて当社のTSAキット#2に含まれているHRPヤギ抗マウスIgGおよびAlexa Fluor® 488標識tyramideを用いて視覚化した。この切片を、青色蛍光を示すAlexa Fluor® 350色素標識小麦胚芽アグルチニンと近赤外蛍光TOTO-3核染色剤で対比染色した。

製品：

Cat.No.	製品名	サイズ
E6589	ELFR 97 phosphatase substrate (ELFR 97 phosphate) *5 mM in water* *contains 2 mM azide*	1 mL
E6601	ELFR 97 Endogenous Phosphatase Detection Kit	1 kit
T20911	TSA Kit #1 *with HRP-goat anti-mouse IgG and biotin-XX tyramide* *50-150 slides*	1 kit
T20912	TSA Kit #2 *with HRP-goat anti-mouse IgG and Alexa Fluor 488 tyramide* *50-150 slides*	1 kit
T20914	TSA Kit #4 *with HRP-goat anti-mouse IgG and Alexa Fluor 568 tyramide* *50-150 slides*	1 kit
T20915	TSA Kit #5 *with HRP-goat anti-mouse IgG and Alexa Fluor 594 tyramide* *50-150 slides*	1 kit
T20916	TSA Kit #6 *with HRP-goat anti-mouse IgG and Alexa Fluor 647 tyramide* *50-150 slides*	1 kit
T20917	TSA Kit #7 *with HRP-goat anti-mouse IgG and Alexa Fluor 350 tyramide* *50-150 slides*	1 kit
T20921	TSA Kit #11 *with HRP-goat anti-rabbit IgG and biotin-XX tyramide* *50-150 slides*	1 kit
T20922	TSA Kit #12 *with HRP-goat anti-rabbit IgG and Alexa Fluor 488 tyramide* *50-150 slides*	1 kit
T20924	TSA Kit #14 *with HRP-goat anti-rabbit IgG and Alexa Fluor 568 tyramide* *50-150 slides*	1 kit
T20925	TSA Kit #15 *with HRP-goat anti-rabbit IgG and Alexa Fluor 594 tyramide* *50-150 slides*	1 kit
T20926	TSA Kit #16 *with HRP-goat anti-rabbit IgG and Alexa Fluor 647 tyramide* *50-150 slides*	1 kit
T20927	TSA Kit #17 *with HRP-goat anti-rabbit IgG and Alexa Fluor 350 tyramide* *50-150 slides*	1 kit
T20931	TSA Kit #21 *with HRP-streptavidin and biotin-XX tyramide* *50-150 slides*	1 kit
T20932	TSA Kit #22 *with HRP-streptavidin and Alexa Fluor 488 tyramide* *50-150 slides*	1 kit
T20933	TSA Kit #23 *with HRP-streptavidin and Alexa Fluor 546 tyramide* *50-150 slides*	1 kit
T20934	TSA Kit #24 *with HRP-streptavidin and Alexa Fluor 568 tyramide* *50-150 slides*	1 kit
T20935	TSA Kit #25 *with HRP-streptavidin and Alexa Fluor 594 tyramide* *50-150 slides*	1 kit
T20936	TSA Kit #26 *with HRP-streptavidin and Alexa Fluor 647 tyramide* *50-150 slides*	1 kit
T20937	TSA Kit #27 *with HRP-streptavidin and Alexa Fluor 350 tyramide* *50-150 slides*	1 kit
T30950	TSA Kit #37 *with HRP-goat anti-mouse IgG and Alexa Fluor 405 tyramide* *50-150 slides*	1 kit
T30951	TSA Kit #38 *with HRP-goat anti-rabbit IgG and Alexa Fluor 405 tyramide* *50-150 slides*	1 kit
T30952	TSA Kit #39 *with HRP-streptavidin and Alexa Fluor 405 tyramide* *50-150 slides*	1 kit
T30953	TSA Kit #40 *with HRP-goat anti-mouse IgG and Alexa Fluor 555 tyramide* *50-150 slides*	1 kit
T30954	TSA Kit #41 *with HRP-goat anti-rabbit IgG and Alexa Fluor 555 tyramide* *50-150 slides*	1 kit
T30955	TSA Kit #42 *with HRP-streptavidin and Alexa Fluor 555 tyramide* *50-150 slides*	1 kit
Z25090	Zenon Alexa Fluor 488 Mouse IgG1 Labeling Kit *enhanced with TSA technology* *25 labelings*	1 kit
Z25091	Zenon Alexa Fluor 568 Mouse IgG1 Labeling Kit *enhanced with TSA technology* *25 labelings*	1 kit