Click-iT™ EdU Cell Proliferation Assay Kit

プレートリーダーで新生のDNA合成を24時間後まで測定できる

Click-iT™ EdU マイクロプレートアッセイ

特長

1. 変性ステップも厳しい処理も不要　→　正確で安定性のある性能
2. アッセイがシンプルで2時間以内　→　初めての方でもお使いいただけます。
3. マルチプレキシング*に適合　→　いくつかのCell Cycle色素やAlexaFluor®647抗体（表面や細胞内マーカーへ適用）などと共に機能します。

*Click-iT™ EdUは、GFPやR-PEおよびそのタンデムコンジュゲート（Alexa Fluor® 610-R-PEなど）との併用には適していません。

分離が良い

Fig.1 Results obtained using the Click-iT™ EdU reagents typically surpass those from the BrdU assay.
A. Results obtained using the new Click-iT™ EdU detection method. Showing a dual-parameter plot of Click-iT™ Alexa Fluor® 488 azide versus 7-AAD cell sycle staining.	B. Results using the standard acid denaturation method for the antibody-based detection of incorporated BrdU. Showing a dual-parameter plot of anti-BrdU-Alexa Fluor® 488 versus 7-AAD cell cycle staining.

変性不要

Fig.2 Click-iT™ chemistry works without a harsh denaturation step. Jurkat cells analyzed using a standard aldehyde-based protocol.
A. Results obtained using the Click-iT™ detection method.	B. The antibody-based assay is not able to reach the incorporated BrdU without DNA denaturation.

抗体と異なり蛍光体が非常に小さい

Fig.3 Click-iT™ Alexa Fluor®488 azideと抗体とのサイズ比較

EduアッセイとBrdUアッセイの比較 Click-iT EdU （左）アッセイは小サイズの色素アザイドは温和な条件で取り込まれEduを効果的に検出します。その為、反応は安定しており正確です。BrdU （右）アッセイでは標識抗体のサイズが大きい為、HCｌやDnaseでDNAを変性する厳しい処理をする必要があります。

シンプルなワークフロー

プロトコール  [PDF 355 KB ]

1. 固定、室温15分、洗浄
2. 浸透化　室温30分、洗浄
3. Click-iT™ラベリングカクテル中でインキュベート30分、洗浄
4. オプション: cell cycle stainでインキュベート15〜30分

原理

1. チミジンのアルキン修飾ヌクレオチドアナログであるEdU（5-ethynil-2’-deoxyuridine）は、DNA合成が活発な期間中にDNAに取り込まれます。
2. 検出はクリック反応（銅が触媒する、アルキンとアジドの間の共有結合反応）に基づきます。
3. キットに用いられているアジドはAlexa Fluor®488アジドで、488励起（青色レーザー）を用いて効率的に励起されます。
4. 小サイズの色素アジドが温和な条件で取り込まれたEdUの効率的な検出を可能にしています；Alexa Fluor®488アジドがDNAに接近するには、標準的なアルデヒド固定や界面活性剤による浸透化で十分。
5. この点はBrdUアッセイと好対照をなしています：BrdUアッセイでは、抗BrdU抗体で検出できるようにするために、BrdUを露出させるためにＨＣlまたはDNaseを用いたDNA変性を必要とします。

Click-iT™ EdU Alexa Fluor® 488（HCS） assay画像データ

Multicolor imaging analysis of proliferating HeLa cells. Cells were treated with 10 mM EdU for 30 minutes, then fixed and permeabilized. EdU incorporated into newly synthesized DNA by actively proliferating cells was detected using the green-fluorescent Click-iT EdU Alexa Fluor 488 High-Throughput Imaging (HCS) assay (A10027, A10028, panel A). Following the Click-iT detection reaction, nuclei were stained with the blue-fluorescent Hoechst 33342 dye (panel B); tubulin was labeled with an anti-tubulin antibody (A11126) and visualized using Alexa Fluor 555-labeled goat anti-mouse IgG antibody (A21422, panel C). The composite image containing all 3 stains is shown in panel D.

Click-iT™ EdU マイクロプレートアッセイ

特長

• 96または384のウェルの蛍光マイクロプレートリーダーで解析できます。
• シグナルをHRP-Amplex UltraRedで増幅しています。
  • 他の蛍光・発色のHRP基質より高感度
  • 増幅前に、ハイスループット・イメージング（HCS）で測定可能
• 24時間後まで測定できます。
• アッセイ時間は約90分で市販品に比べて迅速です。

ワークフロー

1. EdUで細胞を標識
2. Oregon Green® azideを結合
3. HRP付き Oregon Green ®抗体、Amplex UltraRed®でシグナルを増幅
4. 停止液を添加し蛍光を測定

Click-it　Eduマイクロプレートアッセイと市販比色定量製品との比較データ

市販比色定量	Ckick-iT™ Edu
市販比色定量では24時間保存後ではシグナルが低下したのに、Click-it™ Eduは24時間後でもシグナルが安定している。

製品情報

製品名	サイズ	製品番号
Click-iT™ EdU Microplate Assay	400 assays分	C10214
Click-iT™ Edu Pacific Blue Flow Cytometory Assay Kit	1 KIT	A10034
Click-iT™ Edu Alexa Fluor® 488 Hight Throuphput Imaging (HCS)Assay2-plate	1 KIT	A10027
Click-iT™ Edu Alexa Fluor® 488 Hight Throuphput Imaging (HCS)Assay10-plate	1 KIT	A10028
Edu (5-ethynyl-2’-deoxyuridine)	1 KIT	A10044
Click-iT™ Edu Alexa Fluor® 647 Flow Cytometry Assay Kit *50 assays*	1 KIT	A10202
Click-iT™ Edu Alexa Fluor® 647 High-Throughput Imaging (HCS) Assay *2-plate size*	1 KIT	A10208
Click-iT™ Edu Alexa Fluor® 594 High-Throughput Imaging (HCS) Assay *2-plate size*	1 KIT	A10209

価格は上のカタログ・製品番号検索に製品番号を入力してご確認ください。

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