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図4 Click-iT® EdU for HCS Assay使用例
HeLa細胞に 10 μM EdU を添加し2時間培養後、Click-iT® EdU Alexa Fluor 488 azide (緑)、抗チューブリン抗体＋Alexa Fluor 555標識2次抗体（赤）、DAPI（青）で染色した。
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図5 Click-iT® EdU for Imaging Kit, in vivoでの 使用例
術前2時間前にAlexa ４88 Imaging Kit C10083中のEduを腹膜内に処理。腸の組織はホルマリン固定後、パラフィン切片を作成。カクテルを1スライド当たり~250 μl 反応させた。切片洗浄後、DAPI入りの溶媒でマウントした。細胞中緑蛍光は陽性、核は青蛍光、赤蛍光は自家蛍光。画像はエンハンスしています。 画像はSima Zacharek氏, Children's Hospital Bostonによる。
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図6 Muntjac (キョン：小型シカ）細胞
Click-iTEdu Alexa Fluor 647 HCS assay kitを使用。10μMのEdUを45分処理。細胞を固定化し、新合成されたDNAはFarレッドのClick-iT® EdU Alexa Fluor 647 High-Throughput (HCS) Assay (A10208)で検出（疑似カラーピンク）。チューブリンは抗チューブリン抗体 AlexaFluor350ｇｏａｔAnti-mouse IgG抗体にて染色（青蛍光）。ゴルジはgreen fluoresecent lectin HPA from Helix pomatia ,Alexa Fluor®488コンジュゲードにて染色（緑蛍光）。Peroxisomesは抗peroxisome antibody抗体orange fluorescent AlexaFluor®555donkey 抗rabbit IgG抗体にて染色（オレンジ蛍光）。 |
図7 アルファルファの培養組織にClick-iT® EdU Alexa 488 Imaging Kit (C10083)をプロトコル通り処理
DAPIで対比染色し 褪色防止剤入りのメディウムでマウントした。コンフォーカルレーザーOlympus FluoView™ FV1000を使用。405 nm 、488 nm レーザーで励起し、UPLSAPO 60x 油浸レンズ (NA:1.35) で画像取得。1.28 μm/slice 切片をマージしDIC画像と オーバーレイした。新合成のDNAに取り込まれたEdUは、細胞壁を消化させる必要なしにAlexa Fluor® 488 dye 緑蛍光で検出。核はDAPI青蛍光で染色。 Ferhan Ayaydin,氏 Cellular Imaging Laboratory, Biological Research Center, Szeged, Hungaryによる。 |
| Click-iT® reaction rinse bufferなし
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Click-iT® reaction rinse bufferあり
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| Click-iT® reaction
rinse bufferなし |
Click-iT® reaction
rinse bufferあり |
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| NIH 3T3
cells were treated with 10 uM EdU for 30 minutes.
Following fixation and permeabilization, EdU that
had been incorporated into newly synthesized DNA
was detected with Alexa Fluor® azide from
the Click-iT® EdU Imaging Assay. Cells were
then washed with the Click-iT® reaction rinse
buffer and tubulin was labeled with a mouse anti-tubulin
antibody (Cat. no. A11126) and visualized with
a green-fluorescent Alexa Fluor® 488 anti-mouse
IgG antibody (Cat. no. A11029). |
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