Click-iT® RNA Imaging & HCS Assays

特長

• 細胞や組織における、全体的なRNA合成の時間空間的な検出を可能にしました。
• EUがキットになり、新生RNA合成のイメージングやHCSアッセイが容易になりました。 迅速で高感度で便利。
• Total RNAの平均35ウリジン残基ごとに1個取り込みます。
• 標識パルス時間の長さを変えて、バルクのRNAのターンオーバーをイメージングで調べられます。
• ホールマウント（whole-mount）でも切片でも転写活性全体が高いかどうかをイメージングで検出できます。
• その他、Click-iT共通の特長を持ちます
• 組み合わせる検出試薬によって、蛍光顕微鏡、フローサイトメトリー、ハイコンテントイメージング（HCS）で解析
• PNAS論文より：Jao CY, Salic A (2008) PNAS,105: 15779 - 15784.
  Exploring RNA transcription and turnover in vivo by using click chemistry　 全文はこちらから


注．標識後のシークエンシングは勧められません。新生合成の検出用です。

イメージングのワークフロー

1. 細胞をプレート
2. オプション：テスト化合物や薬剤処理
3. EUで細胞をインキュベート
4. 細胞を固定して透過処理
5. EUを検出
6. Click-iT® reaction rinse buffer で細胞を洗浄
7. オプション：他の固定細胞染色と抗体で細胞を染色。
8. イメージング

RNAの細胞内局在性

1. 正常なRNA合成を抑えるためにアクチノマイシンで細胞を処理し、ウイルスを感染
2. ウイルス核タンパク質と共局在することにより新生のRNA合成が開始するかどうかEUで標識して観察

Click-iT® RNA Imaging Assay	ウィルス核タンパク質	重ね合わせ
ウイルスで処理された細胞の転写部位を示すEUとウィルス核タンパク質の局在性が一致 Vero cell cultures infected with Tacaribe virus were pretreated with 2 μM Actinomycin D and incubation was continued in the presence of 1 mM EU. Cultures were fixed with cold MeOH, permeabilized using Triton® X-100 and incorporated EU detected with Click-iT® RNA Alexa Fluor® 488 Imaging assay (C10329). Virus nucleoprotein was detected using an Alexa Fluor® 594 labeled monoclonal antibody.

定量分析

示した量のアクチノマイシンDでHeLa細胞を18時間処理。 5-ethynyl uridine（EU；カタログ番号E10345）で、RNA合成に対するその影響をアッセイ。 1 mM EUで細胞を1時間培養。 それから細胞は固定し透過処理し、新しく合成されたRNAに取り込まれたEUを、緑色蛍光のAlexa Fluor® 488 azide（カタログ番号A10266）を用いて、Click-iT® Cell Reaction Buffer Kit （カタログ番号C10269）を用いて検出。 定量分析は、Thermo Scientific Cellomics® ArrayScan® VTI と コンパートメント解析バイオアプリケーションを用いて行ないました。

製品情報

価格は上のカタログ・製品番号検索に製品番号を入力してご確認ください。

<< 前のページに戻る