ライフテクノロジーズジャパン(Life Technologies Japan Ltd.)

小さい分子として取り込ませられる標識試薬

クリックケミストリー試薬に脂質・糖修飾など試薬追加

クリックケミストリー 試薬 ファルネシル(脂質修飾)が加わりました。

クリックケミストリーは 前駆体を取り込ませた後、蛍光体をクリック反応により結合させます。

前駆体を取り込ませた後蛍光体をクリック反応により結合図

低分子なので穏やかな処理条件で取り込まれます。

低分子図

クリックケミストリー試薬機能

クリックケミストリーは、ツーステップ手順で目的分子を標識して検出するためのbio-orthogonalなまたは生物学的にユニークな部分を用いる化学反応です。ツーステップ手順には、アジドとアルキンのトリアゾール形成(銅で触媒)が含まれます。


特長

  • 効率的:
    反応は1時間以内に完了し、極端な温度または溶媒を必要としません。

  • 特異的:
    標識と検出タグの反応は選択的で特異的です。

  • 生物学的サンプルへの適用性が広い:
    クリックケミストリーで標識された分子は、複雑な生物学的サンプルに適用でき、高感度で低バックグラウンドで容易に検出できます。この点が、ユニークではない官能基であるアミンやスルフヒドリルをターゲットとするサクシニジミル・エステルやマレイミドを用いた従来の化学反応とは異なります。

  • 生物学的に不活性:
    反応のコンポーネントの副反応はこれまでのところ見出されていません。

  • 安定:
    反応産物は不可逆的共有結合を含んでいます。

用途

クリックケミストリー試薬

アプリケーション

Click-iT® palmitic acid, azide (15-azidopentadecanoic acid)

タンパク質パルミトイル化。タンパク質の(細胞内) 輸送(Trafficking)のための重要な翻訳後修飾(PTM)。

Click-iT® myristic acid, azide (15-azidopentadecanoic acid)

タンパク質ミリスチル化、タンパク質の(細胞内) 輸送(Trafficking)のための重要な翻訳後修飾(PTM)。

Click-iT® farnesyl alcohol, azide *mixed isomers*

タンパク質ファルネシル化。タンパク質の(細胞内) 輸送(Trafficking)のための重要な翻訳後修飾(PTM)。

Click-iT® geranylgeranyl alcohol, azide *mixed isomers*

タンパク質ゲラニルゲラニル化。タンパク質の(細胞内) 輸送(Trafficking)のための重要な翻訳後修飾(PTM)。

Click-iT® homopropargylglycine (HPG)

アルキン修飾されたアミノ酸で、タンパク質に取り込まれることができ、新生のタンパク質合成をモニターすることができます。

Click-iT® Protein Reaction Buffer Kit

アジドかアルキンで標識したタンパク質を含むサンプルを持っている研究者に、ゲル電気泳動、ウエスタンブロット、質量分析のためのクリック検出試薬用のバッファーを提供します。


Click-iT®ケミストリー試薬

化合物
製品
番号
アジド
または
アルキン
適用
用量
インキュベーション
時間と条件*
Click-iT® GalNAz (tetraacetylated N-azidoacetylgalactosamine)
C33365
アジド
O結合型糖タンパク質
25-50 µM
24-72 時間
Click-iT® GlcNAz (tetraacetylated N-azidoacetylglucosamine)
C33367
アジド
O-GlcNAz-修飾糖タンパク質
Click-iT® ManNAz (tetraacetylated N-azidoacetyl-D-mannosamine)
C33366
アジド
シアル酸-修飾糖タンパク質
Click-iT® palmitic acid, azide
C10265
アジド
パルミトイル化タンパク質
25-200µM
4-6 時間
Click-iT® myristic acid, azide
C10268
アジド
ミリストイル化タンパク質
10-50 µM
Click-iT® HPG (L-homopropargylglycine)
C10186
アルキン
新生のタンパク質合成
25-50 µM
1-4時間、細胞が80-90%コンフルエントになったら、培地に添加します。メチオニンなしの培地が必要です。#
Click-iT® AHA (L-azidohomoalanine)
C10102
アジド
新生のタンパク質合成
Click-iT® farnesyl alcohol, azide
C10248
アジド
ファルネシル化タンパク質
24-48 時間、細胞が40-50%コンフルエントになったら、培地に添加します。
Click-iT® geranylgeranyl alcohol, azide
C10249
アジド
ゲラニルゲラニル化タンパク質
Click-iT® fucose alkyne
C10264
アルキン
フコシル化グリカン
24-72 時間
* These are suggested doses and incubation times for typical immortalized cell lines (e.g., growth medium, cell density, cell type variations, and other factors may influence labeling). For initial experiments, we recommend testing a range of Click-iT® metabolic labeling reagent concentrations to determine the optimal concentration for your cell type and experimental conditions. Generally, reagents requiring labeling over 1 or more days may be added when the cells are seeded; however, some slow-growing cells may need time to become established prior to exposure to the labeling reagent.
# メチオニンなしの培地の例: Dulbecco’s Modified Eagle Medium (D-MEM contains 4,500 mg/L D-glucose,without L-glutamine, sodium pyruvate, L-methionine, and L-cysteine, Cat. no. 21013) RPMI Medium 1640, contains no L-methionine (Cat. no. 050001DJ)


検出試薬

アジド・アルキン修飾脂質やアミノ酸を取り込ませた後、下記検出試薬を反応させて検出します。


FC:フローサイトメトリー, FM:蛍光顕微鏡, GE:1次元2次元ゲル電気泳動, HCA:ハイコンテント分析,
MS:質量分析法, WB:ウェスタンブロット
検出試薬*
アジドか
アルキンか
製品番号
Ex/Em**
使用法
検出技術
Alexa Fluor® 488
アジド
A10266
495/519
蛍光色素またはハプテン
FC, HCA, FM
アルキン
A10267
Alexa Fluor® 594
アジド
A10270
590/617
蛍光色素
FM, HCA
アルキン
A10275
Alexa Fluor® 647
アジド
A10277
650/655
蛍光色素
FC, HCA, FM
アルキン
A10278
Biotin
アジド
B10184
該当しない
ハプテン
FC†, HCA†, FM†, WB†, MS
アルキン
B10185
Oregon Green® 488
アジド
O10180
496/524
蛍光色素またはハプテン
FC, HCA, FM
アルキン
O10181
Tetramethylrhodamine
アジド
T10182
555/580
蛍光色素またはハプテン
FM, HCA, MS, GE,
抗TAMRA抗体でのWB
アルキン
T10183
* Use with Click-iT® Cell Reaction Buffer Kit (Cat. no. C10269) for subsequent analysis by flow cytometry or imaging, or Click-iT® Protein Reaction Buffer Kit (Cat. no. C10276) for subsequent analysis by standard biochemistry techniques such as gel electrophoresis.
**Approximate excitation/emission maxima in nm.
†Requires streptavidin conjugate.

製品情報

製品名
サイズ
製品番号
Click-iT® homopropargylglycine (HPG)
5 mg
C10186
Click-iT® palmitic acid, azide (15-azidopentadecanoic acid)
1 mg
C10265
Click-iT® myristic acid, azide (12-azidododecanoic acid)
1 mg
C10268
Click-iT® Protein Reaction Buffer Kit
1 kit
C10276
Click-iT® farnesyl alcohol, azide *mixed isomers*
1 mg
C10248
Click-iT® geranylgeranyl alcohol, azide *mixed isomers*
1 mg
C10249
Click-iT® fucose alkyne (tetraacetylfucose alkyne)
5 mg
C10264
価格は上のカタログ・製品番号検索に製品番号を入力してご確認ください。

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